[发明专利]降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合多肽。

背景技术

降钙素(calcitonin，CT)可直接抑制破骨细胞(osteoclasts，OC)增殖，阻止骨溶解，促进骨形成，并能迅速减轻因骨质疏松而引起的腰锥病疼痛或发病，是治疗骨质疏松症的首选药物之一。它还可以有效调节骨钙与血钙之间的平衡，并有镇痛作用；对治疗高血钙症、变形性骨炎、甲状腺机能亢进以及各种原因引起的骨骼疼痛(如类风湿、肿瘤)等有非常明显的效果，在骨痛病的治疗中，降钙素的镇痛效果可达吗啡的30～50倍。由于降钙素能抑制胃酸分泌，它可用于治疗急性胃溃疡；由于降钙素能抑制胰腺激素分泌及抑制酶的释放，它可用于治疗急性胰腺炎；降钙素对甲状旁腺机能亢进也有治疗作用。降钙素在慢性多关节炎及心血管疾病的治疗方面也有一定的潜力。鲑鱼降钙素(salmon calcitonin，sCT)是天然降钙素中活性最高的一种，其活性约是人降钙素的40倍，与人降钙素具有同源性。细胞实验证明鲑鱼降钙素作用在人降钙素受体上，所产生的第二信使cAMP的量远远大于人降钙素，因此其使用量占临床用降钙素的近50％。

降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)是调节心血管活动的重要神经递质之一，是迄今所知的人体最强的舒血管物质。降钙素基因相关肽扩冠状动脉作用比硝酸甘油、硝普钠强240倍，它是由辣椒素敏感的感觉神经末梢释放的一种生物活性多肽，广泛分布于神经及心血管系统。在心血管系统中，降钙素基因相关肽生物活性具有多样性，如强大的舒血管作用、抑制平滑肌细胞增殖和内皮细胞凋亡，也能促进细胞分化增殖，参与血管新生。CGRP的舒张冠状血管的作用远强于P物质(substance P，SP)、心钠素和去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)；比乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)等强10000倍左右，比异丙肾上腺素强10～100倍。CGRP血管舒张反应呈现不同程度的剂效——依赖性，即适当加大CGRP的注入剂量时反应增强，浓度低则效应缓慢，但持续时间长。Shen等(Shen YT，Pittman TJ，Buie PS.Functional role of alpha-calcitonin gene-related peptide in theregulation of the cardiovascular system[J].Pharmacol Exp Ther，2001，298(3)：551-558.)认为尽管外源性的α-CGRP可以引起不同部位血管床的舒张，但在正常状态下的内源性α-CGRP对血管调节并不起重要作用。经反复实验验证降钙素基因相关肽能够抑制血管平滑肌细胞增殖、保护内皮细胞和抑制血管新生，防治高血压，防止充血性心力衰竭，防治心绞痛，防治心肌梗死和治疗休克。而且具有在脊髓水平调制痛觉的功能，可调节破骨细胞骨吸收和促进成骨细胞分裂。

目前市场上只有降钙素产品，而降钙素基因相关肽只停留在实验室研究阶段。

发明内容

本发明的目的是为了得到一种既含有降钙素又含有降钙素基因相关肽的产品，而提供了一种降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽。

降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；且降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽C端酰胺化。

经实验验证本发明降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽保留了降钙素基因相关肽和鲑鱼降钙素各自的酶活性；而且偶联反应产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的速度是同时加入两种单一(降钙素基因相关肽和鲑鱼降钙素)多肽的反应体系反应速度的两倍以上，同时过渡态时间(transienttime)大大缩短，缩短至原过渡态时间的1/4左右。

本发明为了提高msCT生物活性依据msCT生物活性对构象依存性的现象从而对其氨基酸残基进行了改造，将msCT第8位的缬氨酸变为甘氨酸、第16位的亮氨酸用丙氨酸置换、再删除22位的酪氨酸(msCT[Gly⁸，Ala¹⁶，del-Tyr²²])，msCT的生物活性由4500IU/mg提高到8600IU/mg。

本发明降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽C端酰胺化可提高降钙素的活性约30倍(C端酰胺化的本发明降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽生物学活性为4500IU/mg，C端非酰胺化的降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合多肽生物学活性为100～200IU/mg)。

具体实施方式