[发明专利]新序列人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的克隆及其高效表达

权利要求书

1.一种新序列人胰岛素样生长因子-I基因，包括该人胰岛素样生长因子-I氨基酸序列：Gly Pro Glu Thr Leu Trp Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Trp Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Trp Trp Phe Arg Ser Trp Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Trp Ala Pro Leu Lys Pro Ala Lys Ser Ala，其特征在于新序列人胰岛素样生长因子-I基因的核苷酸为：GGC CCG GAAACC CTG TGG GGC GCA GAA CTG GTG GAT GCA CTG CAG TTT GTG TGG GGC GAT CGC GGC TTT TAT TTC AAC AAA CCG ACC GGCTAT GGC TCC AGC AGT CGC CGC GCG CCG CAG ACC GGC ATT GTG GAT GAA TGG TGG TTT CGC AGC TGG GAT CTG CGC CGC CTG GAAATG TATTGG GCG CCG CTG AAA CCG GCG AAG TCA GCATAG。

2.一种如权利要求1所述的新序列入胰岛素样生长因子-I基因的克隆，其特征在于在分析 了该基因的大肠杆菌稀有密码子以后，运用大肠杆菌密码子使用频率表和密码子的兼并 性，在不更改氨基酸的基础上，对克隆到的IGF-1基因序列进行同义突变，将基因更改为 大肠杆菌偏嗜性的基因，利用人工合成的方法，以最低的成本合成了三条单链DNA，采用 拼接PCR的方法获得该基因的全长。

3.根据权利要求1所述的新序列人胰岛素样生长因子-I基因，其特征在于该序列的高效表 达方法为，将改造后的基因克隆到融合表达载体pET32a(+)上，并导入到E.coli BL21中， 采用IPTG诱导的方法诱导该基因的大量表达，表达量可达到35-40％。