[发明专利]肠癌富伴侣分子－抗原肽复合物瘤苗及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种肠癌富伴侣分子-抗原肽复合物瘤苗及其制备方法。

(二)背景技术

已知细胞毒性T淋巴细胞(CTL)作用在抗肿瘤免疫中起主要作用。 但不同的肿瘤有不同突变的CTL表位，故CTL作用不具备通用性，且其 分离和鉴定也较困难。近年来发现某些伴侣蛋白分子如多种热休克蛋白 (HSP)在肿瘤抗原递呈中的作用。热应激下大量合成的这类伴侣分子， 具有结合肿瘤细胞内各种由突变产生的肿瘤抗原多肽(CTL表位)的特 性。由此形成HSP-抗原肽复合物。通过与抗原提呈细胞(APC)表面的 HSP受体结合而进入APC。与通常的APC对外源性抗原的处理不同，此 时的肿瘤抗原肽主要由MHCI分子途径以“多肽-HSP-MHCI”复合物提 呈在APC表面供CD8⁺T细胞识别并活化。从而诱导特异的抗肿瘤CTL 反应。这个过程，目前发现由多种伴侣分子蛋白如HSP70，HSP90， HSP110，gp96，grp170，在多环节、途径，相互协调完成。伴侣分子蛋 白瘤苗的制备不必分离和鉴定肿瘤抗原。此外，HSP还具有诱导树突状 细胞(DC)成熟活化，促分泌细胞因子，传递信号和增强肿瘤细胞免疫 原性等作用。实验和临床肿瘤治疗也证明了其诸多优越性。

但目前的研究多着眼于某一种伴侣分子蛋白，不能充分考虑到多种 HSP分子协调作用，也没兼顾到不同的肿瘤抗原在不同环节需要不同的 伴侣分子；而且伴侣分子-抗原肽量少和弱免疫原性，影响着疗效。这些 都限制了伴侣分子-抗原肽瘤苗的临床效果。故伴侣分子在诱导机体抗癌 免疫特别是特异性抗癌免疫中起重要作用。提取伴侣分子制备的瘤苗携带 个体肿瘤的抗原肽库，成为多价瘤苗，因无MHC-I类抗原限制，也无须 分离抗原肽(抗原肽已结合在伴侣分子上)，而具有独特优越性。

为此，提高肿瘤细胞的免疫原性，考虑伴侣分子之间的协调性以及获 取足够的肿瘤抗原，对于伴侣分子瘤苗抗肿瘤免疫是非常重要的。近年发 现中药提取物榄香烯能提高肿瘤细胞的免疫原性肿，从而提高肿瘤抗原肽 的合成；放疗以及模拟热疗的热应激不仅能提高肿瘤细胞的免疫原性，更 可诱导肿瘤细胞大量合成热休克蛋白等伴侣分子；在先前的实验中，我们 发现伴侣分子局部密度提高有利于抗肿瘤特异性免疫形成；又鉴于肿瘤特 异性免疫的形成需多伴侣分子在多环节协调起作用，本发明以榄香烯、非 致死量射线照射和不同温度的热应激处理结肠癌细胞，提取已知的在抗癌 特异性免疫形成中具有重要作用的主要伴侣分子，去除部分可能抑制抗癌 免疫的蛋白分子，浓缩制备富伴侣分子-抗原肽复合物的瘤苗。可望一定 程度解决肿瘤抗原肽的量、密度及其呈递中对多伴侣分子的要求。

进一步地，综合治疗是肠癌治疗的发展方向，如何进行综合治疗并 取得最佳协同效果一直是研究的热点和难点。在本发明中，榄香烯因其直 接抑制肿瘤生长而作为化疗药物已应用于临床；放疗、热疗因能大量杀灭 肿瘤细胞而成为临床常用的的抗肿瘤手段，所以，预期该实验有助于形成 一种有效的综合治疗肠癌的新方法：榄香烯全身给药抗癌(新辅助化疗)， 同时术前局部热疗，然后外科手术治疗；最后利用切除的大肠癌组织制备 富伴侣分子抗原肽复合物，以其活化DC细胞回输病人，进一步治疗并预 防癌症复发。

肠癌是常见的恶性肿瘤，位居前三，近年来其发病又呈持续上升态势。 肠癌治疗难点是癌细胞化疗耐药和转移复发；免疫治疗有其独特的优势， 对化疗后转移或耐药的癌细胞更为有效可靠。本发明正是从中凝练出来的 应用开发性研究成果。预期在治疗大肠癌和预防其复发上有较好的应用价 值，产生良好的经济和社会效益。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种含多种、大量的伴侣分子-抗原肽的肠癌瘤苗 及其制备方法。

本发明采用的技术方案是：