[发明专利]一种可用作免疫抑制剂的带有－Pro－Sta－Tyr－残基片段的环肽及其合成工艺

权利要求书

1、一种可用作免疫抑制剂的带有-Pro-Sta-Tyr-残基片段的环肽，环(Ile-Ile-Pro-Sta-Tyr-Val-Pro-Leu)，其结构式为：

2、根据权利要求1所述的可用作免疫抑制剂的带有-Pro-Sta-Tyr-残基片段的环肽，其特征在于为白色粉末，难溶于水，易溶于有机溶剂乙醇，DMSO中。

3、一种如权利要求1或2所述的带有-Pro-Sta-Tyr-残基片段的环肽的合成工艺，其特征在于有如下步骤：

1)脱除氨基保护基：将树脂Fmoc-AAⁿ-CTC Resin或Boc-AAⁿ-MerrifieldResin，用DMF浸泡使之充分溶胀，然后抽干；加入含哌啶的DMF溶液，通氮气反应，再抽干；然后用DMF充分洗涤，以除去残留的脱保护试剂，得到H-AAⁿ-CTC Resin或H-AAⁿ-Merrifield Resin；其中AAⁿ选自氨基酸序列：Ile、Ile、Pro、Sta、Tyr、Val、Pro、Leu中任一氨基酸，n＝1～8任一正整数；

2)接肽反应：在反应器中加入溶解有Fmoc-AAⁿ-OH的DMF溶液，通氮气搅拌，然后加入HBTU或HATU，最后加入NMM，反应，得到Fmoc-AA^n-1-AAⁿ-CTC Resin或Boc-AA^n-1-AAⁿ-Merrifield Resin；抽干，用DMF充分洗涤，然后用甲醇洗涤树脂，以除去氨基酸溶液和DMF，然后用含哌啶的DMF溶液脱保护，得到H-AA^n-1-AAⁿ-CTC Resin或H-AA^n-1-AAⁿ-MerrifieldResin，其中AA^n-1为氨基酸AAⁿ前位的氨基酸，依此类推；

依氨基酸序列，继续用Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Sta-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Leu-OH中其余6种重复以上接肽反应，最终合成出所需肽链：Pro-Ile-Ile-Leu-Pro-Val-Tyr-Sta；

3)肽链的切割：将合成肽链用TFA液进行切割反应，然后减压过滤，收集滤液，用冷乙醚沉淀溶解在切割液中的多肽，高速离心，于真空干燥器中充分干燥，得线性肽链的粗品，再经硅胶柱纯化得线性纯化多肽；

4)肽链的环化：将线性纯化多肽用DMF溶解，加入一定量的EDC、HOBt和DIEA，反应过程用离子阱质谱仪全程跟踪直至所有的线性肽都转化成环状多肽为止；蒸干DMF，得环肽粗品。

4、根据权利要求3所述的环肽的合成工艺，其特征在于树脂为Fmoc-AAⁿ-CTC Resin，氨基酸AAⁿ为Pro，AA^n-1为Ile。

5、根据权利要求3所述的环肽合成工艺，其特征在于所述的肽链的环化步骤后有环肽粗品的纯化步骤：将上述环肽粗品溶于DMSO中，用高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱为C18反相柱，洗脱液：A液为0.1％TFA的水溶液，B液为含0.1％TFA的乙腈水溶液，检测波长为220nm。

6、根据权利要求4所述的环肽合成工艺，其特征在于所述的肽链的环化步骤后有环肽粗品的纯化步骤：将上述环肽粗品溶于DMSO中，用高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱为C18反相柱，洗脱液：A液为TFA的水溶液，B液为含TFA的乙腈水溶液，检测波长为220nm。