[发明专利]一种可用作免疫抑制剂的带有－Ile－Sta－Pro－残基片段的环肽及其合成工艺

权利要求书

1.一种可用作免疫抑制剂的带有-Ile-Sta-Pro-残基片段的环肽，环Ile-Ile-Sta-Pro-Tyr-Val-Pro-Leu，其结构式为：

其中Sta的中文名称为(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸，分子式为C₈H₁₇NO₃。

2.根据权利要求1所述的带有-Ile-Sta-Pro-残基片段的环肽，其特征在于为白色粉末，难溶于水，易溶于有机溶剂乙醇，DMSO中。

3.一种如权利要求1或2所述的可用作免疫抑制剂的带有-Ile-Sta-Pro-残基片段的环肽的合成工艺，其特征在于有如下步骤：

1)脱除氨基保护基：将Boc-Pro-Merrifield Resin 8.0g用DMF浸泡30min，使之充分溶胀，然后抽干；加入含20％哌啶的DMF溶液20mL，通氮气反应30min，再抽干；然后用DMF洗涤5次，以除去残留的脱保护试剂；茚三酮检测，若树脂呈深蓝色，则表明Fmoc保护基已经脱除；得到H-Pro⁷-MerrifieldResin；

2)接肽反应：在反应器中加入溶解有6.6g Boc-Val-OH的DMF溶液，通氮气搅拌几分钟，然后加入HBTU或HATU，最后加入NMM，反应30min；得到Boc-Val⁶-Pro⁷-Merrifield Resin；加入DMF的量以完全浸没树脂为准；抽干，用DMF洗涤5次；然后用甲醇洗涤树脂，以除去氨基酸溶液和DMF，以便进行茚三酮检测，检测结果若树脂呈现无色，则说明反应较为完全；然后再次用含20％哌啶的DMF溶液脱保护，得到H-Val⁶-Pro⁷-Merrifield Resin；按肽链的氨基酸序列依次继续用Boc-Tyr(tBu)-OH、Boc-Pro-OH、Boc-Sta-OH、Boc-Ile-OH、Boc-Ile-OH、Boc-Leu-OH重复以上接肽反应，直至最终合成出所需肽链；完整的合成顺序为：Pro，Val，Tyr，Pro，Sta，Ile，Ile，Leu；

3)肽链的切割：将合成肽链用HF液切割，反应时间为3.0h，然后减压过滤，收集滤液，用冷乙醚沉淀溶解在切割液中的多肽，8000rpm离心10min，于真空干燥器中干燥12h，得线性肽链的粗品，纯度56％；粗品经硅胶柱纯化，粗品纯度92％，得率85％；

4)肽链的环化：将线性纯化多肽0.5g用200mL DMF溶解，加入一定量的EDC、HOBt和DIEA，反应过程用离子阱质谱仪全程跟踪直至所有的线性肽都转化成环状多肽为止，总时间约30-40分钟；蒸干DMF，得环肽粗品，粗品纯度75％。

4.根据权利要求3所述的环肽合成工艺，其特征在于所述的肽链的环化步骤后有环肽粗品的纯化步骤：将上述环化粗品肽溶于适量DMSO中，用高效液相色谱仪进行分离纯化，色谱柱为C18反相柱，洗脱液：A液为0.1％TFA的水溶液，B液为含0.1％TFA的乙腈水溶液，检测波长为220nm；纯化好的液体进行冻干得最终环化多肽244mg，纯度95.1％，得率65.2％。