[发明专利]转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，尤其是转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法及应用。

背景技术

目前，恶性肿瘤已成为威胁人类健康的最严重疾病之一。随着社会经济的发展，肿瘤的发病率呈上升趋势。所以针对各种肿瘤的预防、发病机制、诊断、治疗和预后的相关研究成为迫切亟待解决的问题。而恶性肿瘤细胞的过度无限增殖、分化障碍及凋亡受阻是其发病的主要病理生理学基础。已经发现，不少肿瘤的发生机制就是由于增殖分化异常引起的，如白血病等。因此，以肿瘤细胞增殖分化相关基因为靶点的关于各种肿瘤的发病机制、诊断、治疗和预后的基础及临床研究成为目前临床与基础研究的热点课题。细胞的增殖分化受到严格调控，转录因子协调细胞中多种基因的表达是其中重要的调控机制。造血细胞的增殖失控、分化能力的丧失将可能导致细胞的恶性转化及白血病的发生。因此，阐明转录因子的功能对于确定细胞增殖分化调控机制以及在细胞恶性转化中的作用具有重要意义。

AML1也称之为PEBP2αB、CBFα2或RUNX1，是一种重要的转录调节因子。它在造血细胞中普遍表达，调节造血细胞的分化和增殖，其异常将导致造血细胞发育异常和血液系统恶性肿瘤的发生。在白血病中，AML1常发生染色体移位，如t(8；21)，t(3；21)和t(12；21)。t(8；21)是急性髓系白血病中最为常见的染色体移位之一。AML1基因和染色体8q22上的ETO基因(又称MTG8)发生重排，由此形成的融合蛋白AML1-ETO中，AML1缺少TD，仅保留了RHD。约25％的儿童ALL存在t(12；21)易位，形成TEL-AML1融合基因。此融合基因可通过Runt同源结构域与野生型AML1竞争DNA结合位点，并可募集N-CoR、mSin3和SMRT核辅助抑制因子，进而与HDAC结合，抑制AML1靶基因的转录。在约6.7％AML中发现有AML1突变，包括点突变、插入、缺失，造成单个氨基酸的改变、肽链合成提前终止和读码框架易位等。这些突变常可以造成AML1表达下降或转录活性丧失。由此可见，AML1不能与靶基因启动子结合或者结合后不能起始转录将会影响靶基因的转录，从而影响正常造血功能。

AML1基因转录后通过选择性剪接产生至少三种异构体AML1a、AML1b和AML1c。其中，AML1b与AML1c仅在氨基末端存在27个氨基酸残基的差异，均具有两个主要的功能结构域：RHD和TD，两者的功能基本相同。AML1c为全长型AML1，即我们通常所说的AML1。AML1a与AML1c起源于相同的启动子，由于剪接的不同，转录剪接后产生不同的mRNA，使得AML1a较之AML1c在羧基端缺少230个氨基酸残基。AML1a具有RUNT同源结构域，但缺少转录激活结构域，因此通常被认为不具有转录激活功能，但由于其具有RHD，可以与AML1b/1c竞争结合靶基因的DNA结合位点，导致靶基因不能正常转录，提示AML1a可能干扰AML1的功能。AML1b可以激活TCRs和GM-CSF的转录，但AML1a却没有此功能。并且，AML1a的过表达可以抑制由G-CSF诱导的髓系祖细胞32Dcl3细胞系的终末分化。有研究表明，在AML中AML1a的表达远高于正常对照。实验也已证实AML1a在急性白血病(AL)中的高表达。此外，AML1a可以抑制由AML1b介导的M-CSFR启动子的转录，提示AML1a对AML1b具有拮抗作用。在成体中，AML1基因的缺失易于发生恶性血液疾病。因此，基于以上结果，AML1a在白血病发生中可能发挥类似于AML1相关白血病中融合蛋白的作用，干扰AML1的正常功能从而导致白血病的发生。

但是，AML1a在造血细胞增殖分化中发挥了何种作用，是否会导致小鼠发生白血病，如果发生白血病，白血病细胞呈现何种表型，目前均不清楚。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法及应用，建立一种小鼠白血病模型，是进行白血病发病机制和靶向治疗的有力工具。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种转导人AML1a基因的淋巴细胞白血病小鼠模型的制备方法，包括以下步骤：