[发明专利]高效生产猪白细胞干扰素的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及一种高效生产猪白细胞干扰素的方法。

背景技术

猪病毒性疾病仍是当前严重制约养猪业健康发展的主要传染病。而传统的传染病治疗方案临床上有时难以凑效，尤其针对病毒病办法不多。猪病毒性疾病至今尚无有效的治疗药物和治疗方法。近年来曾经有人进行过用中草药制剂预防和治疗猪病毒性疾病的试验，但治愈率较低。抗生素及磺胺类药物基本无效。目前，猪干扰素是治疗猪病毒性疾病的有效药物。

猪白细胞干扰素研发工作已取得重大突破，现在养猪场和动物医院广泛使用。结果证明，生产的猪白细胞干扰素对治疗猪瘟，猪病毒性腹泻，猪病毒性感冒等病毒性疾病。人工控制治疗猪瘟和猪病毒性腹泻总治愈率为88.3％和94.2％。

95111427.1提供一种猪白细胞干扰素注射剂及其制造方法；

200410065926.5提供一种高效生产猪白细胞干扰素的方法；

200610124195.6提供一种猪β干扰素重组腺病毒及其构建方法和应用；

200610124194.1提供一种猪α干扰素重组腺病毒及其构建方法和应用。

上述申请的专利中使用常规用鸡新城疫病毒(NDV)诱导猪白细胞产生干扰素含量低。使用该制备方法生产的干扰素含量高，显著降低了生产成本。

羧甲基茯苓多糖是一种具有新型免疫调节作用物质，能刺激人体免疫系统的功能，诱生和促生干扰素产生，也是一种的白细胞调节素。羧甲基茯苓多糖具有增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗放射、保肝、催眠等广泛的药理活性，能诱生与促诱生人血细胞产生干扰素-a(IFN-a)，干扰素-r(IFN-r)，白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，与粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等多种细胞活性因子。羧甲基茯苓多糖是一种新型的生物反应调节剂(BRM)。具有间接抗病毒、抗肿瘤作用。

但有关利用鸡新城疫病毒F株(NDV-F)和羧甲基茯苓多糖作复合干扰素诱导剂高效制备干扰素的方法目前还未见报道。

因此，提供一种高效生产猪白细胞干扰素的方法，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术中的不足之处，提供一种高效生产猪白细胞干扰素的方法。

为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下：

一种高效生产猪白细胞干扰素的方法，其特征在于具体实施步骤如下：

(1)无菌采集猪血，加入10μg/ml卡那霉素和适量抗凝剂，4.0℃冰箱放置；以2000-4000rpm离心猪血，收集灰黄层，用配置好的培养液稀释细胞沉淀物，使白细胞浓度稀释为每ml含1×10⁵-1×10⁷；

(2)白细胞悬液中加入少量干扰素，使其最终浓度为100-1000IU/ml，于37℃水浴搅拌培养0.5-2小时；

(3)再加入羧甲基茯苓多糖，使其最终浓度为25-100μg/ml，于37℃水浴搅拌培养1-2小时；

(4)然后在上述白细胞悬液中再加入适量诱生剂鸡新城疫病毒，使其最终浓度为128-1280血凝单位/ml，37℃摇床搅拌培养18-24小时；

(5)待干扰素达到高峰值时，离心收集上清，加入盐酸调至pH 2.0，4.0℃，放置1-4天，灭活病毒，再加NaOH调至pH 7.0，即得粗制猪白细胞干扰素。

本发明的有益效果是：猪基因工程干扰素具有制备成本高，在临床推广中受到很到限制。本发明利用猪血制备猪白细胞干扰素的方法：其具有很多优点：制备成本低，疗效好。常规用NDV-F诱导猪白细胞产生干扰素含量低，

本发明在NDV-F株诱导白细胞干扰素过程中加入羧甲基茯苓多糖，显著提高利用猪血制备猪白细胞干扰素的含量，显著降低了药物的成本。本产品注入动物机体后，具有疗效好、安全可靠、用量低、无毒副作用和成本低等优点。

具体实施方式

以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1

一种高效生产猪白细胞干扰素的方法，具体步骤如下：

(1)白细胞制备

无菌采集猪血，加入抗生素和抗凝剂，4.0℃冰箱放置。以2000-4000rpm离心猪血，收集灰黄层，用配置好的培养液稀释细胞沉淀物，使白细胞浓度稀释为每ml含1×10⁶。白细胞的分离应在采血后48小时内进行。活细胞数应达到90％以上。

(2)诱生病毒

采用新城鸡瘟病毒(NDV)F株，血凝效价达到适宜滴度方可投产。