[发明专利]大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子印迹聚合物微球及其制备方法，特别是涉及一种大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球及其制备方法。

背景技术

大分子印迹区别于小分子印迹的特征并不是仅仅在于大分子的体积效应，自然界中大分子间的识别现象多决定于局部区域结构的组装或配合。因此，大分子印迹材料与技术的研究中，分子印迹效应的明确判定便成为一个基本的学术问题。

天然生命体系中大分子之间的特异性作用可以划分为两个方面：一是非特异性胶体作用(general colloidal interactions)，通常是受体通过静电作用介入的锁-匙特异性作用阶段，比如带正电的受体蛋白通过选择性结合带负电的DNA螺旋固化特异性基因；二是特异性识别过程，即通过识别位点之间形成氢键结合模板分子与基材，比如蛋白与螺旋连上的官能团的特异性匹配[Adam Baszkin.基材及空气/水界面铺展的蛋白质单层膜上的分子印迹。胶体与表面科学进展128-130(2006)1111-120]许多蛋白分子中的大部分区域都具有重要功能，使得蛋白可以与大量的配体发生作用[Amrita Mohan，Christopher J.Oldfield，Predrag Radivojac.分子识别性质分析。分子生物学期刊。(2006)362，1043-1059]以软湿水凝胶聚合物体系作为基材，印迹蛋白等生物大分子的尝试已有报道[庞兴收，成国祥，陆书来，唐二军。牛血清白蛋白分子印迹带有静电官能团的聚丙烯酰胺凝胶微球的制备。分析化学和生物分析化学。(2006)384：225-230][庞兴收，成国祥，李仁胜，陆书来，张怡华。反相种子悬浮聚合法制备牛血清白蛋白印迹聚丙烯酰胺凝胶微球。分析化学学报550(2005)]此类应用的印迹基材多为多孔网状水凝胶聚合物体系，模板分子则是构象复杂的生物分子，制备成的分子印迹水凝胶聚合物已经具有较好的识别效率。然而，此类模板分子在水凝胶体系中的印迹和识别行为不同于刚性基材上、印迹刚性小分子的经典规律，而是涉及凝胶基材-蛋白模板之间特殊的作用方式、凝胶基材的微观结构(孔隙度和凝胶网络交联度等)以及环境因素的改变等。研究由此产生的对印迹-识别过程的影响，对大分子印迹天然高分子水凝胶体系特有的印迹行为和控制途径的研究变得十分重要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球。

本发明的第二个目的是提供一种大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球的制备方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球，用下述方法制成：

(1)按质量比为1～3∶100的比例，将海藻酸钠溶解于浓度为5～20μmol/L的缓冲体系pH为4.87的卵白蛋白水溶液中，得到海藻酸钠/卵白蛋白复合物溶液；

(2)按体积比为0.1～3∶40的比例，将质量浓度为1％～5％的羟乙基纤维素去离子水溶液与步骤(1)制备的溶液混合，静置脱泡18～22小时；

(3)加入液体石蜡和乳化剂混合液，所述液体石蜡的质量占步骤(2)制备的溶液质量的1％～5％，所述乳化剂与液体石蜡的质量比为20～200∶100，在300～500r/min速度下搅拌30～60分钟，得到外观均一的乳液；

(4)按体积比为1∶2～3的比例，将乳液在300～500r/min速度搅拌下分散在含有分散剂的有机油相中，所述分散剂的克数与所述有机油相的毫升数的比为1.5～4.5∶100，加入质量百分浓度为1％～10％的聚乙烯基吡咯烷酮水溶液，所述聚乙烯基吡咯烷酮水溶液的体积与所述乳液体积比为3.5～6.5∶20，加入质量百分浓度为2％～3％的pH为7.5～8.5的氯化钙水溶液交联成微球，所述氯化钙水溶液占所述有机油相的体积百分比浓度为25％～35％；用去离子水冲洗微球，将所述微球放在质量百分浓度为2％～15％的戊二醛水溶液中进一步交联；然后依次用体积百分浓度为30％、60％、90％的乙醇水溶液、无水乙醇和乙醚浸泡，直至浸出液不能检测出石蜡成分，脱除微球之中的水和石蜡，最后用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液洗脱微球中的模板分子卵白蛋白，制得一种大分子及乳液双印迹海藻酸盐聚合物微球。

所述乳化剂为质量比0.5～2∶1的司盘85和吐温80或司盘80和吐温80复配而成。

所述分散剂为质量比为0.3～3∶1的司盘80和司盘85或司盘80和吐温60复配而成。

所述有机油相为由体积比为0.5～4∶3的三氯甲烷和正己烷或二氯甲烷和正己烷或三氯甲烷和环己烷或二氯甲烷和甲苯组成。