[发明专利]一种鸭涎酶粗品的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于生化试剂酶技术领域，它解决了目前没有鸭涎酶制品的问题。具体涉及一种鸭涎酶粗品的制备方法。

背景技术：

目前，我国对鸭涎成分、作用机理研究的很少，还没有关于鸭涎酶制品的发明专利。据资料表明：唾涎是由遍布口腔粘膜深处的许多大大小小的唾涎腺分泌出来的。大的唾液现有三对：腮腺、颌下腺、舌下腺，小的有唇腺、舌腺、颊腺、腭腺等。唾涎95％以上是水分，还有动物健康必需的淀粉酶、溶菌酶、过氧化酶、过氧化氢酶、粘蛋白、球蛋白、肾上腺皮质激素、高血糖、维生素C、氨基酸、磷酸钙、钾、钠、钙、镁、氯等多种成分。唾涎淀粉酶是三大唾液腺中腮腺所分泌的一种水解的酶类，其主要作用是分解淀粉，使淀粉链中α-1，4葡萄糖苷键水解，生成麦芽糖，麦芽丙糖和糊精混合物，因而，唾液淀粉酶是消化代谢过程中必不可少的酶类；唾液还有可以清除口腔中食物残渣和异物，保持口腔的清洁；唾涎具有抗菌和凝血的作用，如口腔里的伤口往往比其它地方好得快，主要原因在于唾涎中的溶菌酶有杀菌的能力，可阻止口腔内细菌的大量繁殖；唾涎中的过氧化物酶、过氧化氢酶和维生素C等具有抗癌能力，能过消除致癌物质的毒性。

鸭涎酶的功效：鸭涎酶是可能是一种复合酶，它含有α-1，4淀粉酶，还可能含有蛋白酶、纤维素酶、溶菌酶、过氧化物酶及过氧化氢酶等等。中医的《海上方》认为鸭涎的功能是：治小儿痓风，头及四肢皆往后，以鸭涎滴之。又治蚯蚓吹小儿阴肿，取雄鸭涎抹之。《食物本草会纂》：谷芒刺喉，饮鸭涎。

发明内容：

本发明鸭涎酶粗品的制备方法解决了目前没有鸭涎酶制品的问题，其产品便于生化研究和生物制品的应用。

本发明的技术方案如下：

一种鸭涎酶粗品的制备方法，其特征在于，它是由以下的制备方法获得的。

1、实验动物：身体健康，无疫病的100只鸭子。

2、鸭涎采收和储藏：为鸭科动物家鸭的唾涎。以生姜少许，塞鸭口中，将鸭倒悬，其涎即下，接取自然流出口腔外的唾涎，用塑料袋收集，鲜用或冷藏。

3、粗酶提取方法：制备条件是鸭涎粗酶的温度小于10℃，将收集的鸭涎用40目筛网过滤，去杂质，取滤液，在搅拌下加5mol/LHCl，调pH值为4-5，加0.6mol/L ZnCl₂适量，再用5mol/L NaOH在搅拌下调pH值为8-9，离心或过滤，弃上清液或滤液，取沉淀，采用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％，即得鸭涎酶粗品。

4、蛋白质含量测定法：采用考马斯亮蓝法(Bradford法)。

5、唾涎淀粉酶活性的测定：按崔福生《医学生化检测手册》天津：天津科学技术出版社，1982，785-795记载的方法进行唾涎淀粉酶活性的测定。

6、工艺流程：

验验无病的鸭涎→制备条件是鸭涎温度小于10℃→用40目筛网过滤→弃杂质→留滤液→在搅拌下加5mol/L HCl，调pH值为4-5→加鸭涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl₂溶液→用5mol/L NaOH在搅拌下调pH值为8-9→离心或过滤→弃上清液或滤液→取沉淀→用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％→包装即得成品鸭涎酶粗品。

7、技术要点：

(1)鸭涎原料验收：试验动物必须经过严格检验，来源于非疫区、无疾病鸭的口涎。制备条件是鸭涎粗酶的制备温度小于10℃。

(2)去杂质：用40目筛网过滤，弃杂质，留滤液。

(3)调酸性：在搅拌下加5mol/L HCl，调pH值为4-5，便于下面的ZnCl₂更好溶解。

(4)中性盐沉淀：加鸭涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl₂使鸭涎中的酶和蛋白质沉淀。选择氯化锌是因为其用量少、盐析作用强、对粗酶的使用无毒副作用及不良影响。

(5)调碱性：用5mol/L NaOH调pH值8-9，这是从沉淀和产品含量考虑，一方面pH越高越有利于沉淀，另一方面鸭涎中的中性蛋白酶在pH值7处对鸭涎中各种酶和蛋白质分解越大，还有pH值太低与太高都不有利于鸭涎酶的稳定。

(6)离心或过滤：离心方法是离心机转速大于4000转/分，过滤方法可采用真空过滤、加压过滤或常压过滤，弃上清液或滤液，取沉淀。

(7)干燥：用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％。