[发明专利]豇豆基因型耐盐能力的技术鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及到蔬菜作物盐胁迫下其耐盐程度的高低，具体来说是涉及豇豆耐盐能力的鉴定方法。

背景技术

盐害是影响豆类生产最严重的非生物胁迫因素之一，严重影响作物的生长发育，引起干物质和产量都下降，因而作物的耐盐性倍受关注。众所周知，耐盐性受多基因调控且与多种蛋白相关。因此盐害几乎影响了植物的所有功能，如对水分吸收的减少、引起钠离子累积以及矿物离子的不平衡，由钠离子渗入而引发的细胞内生化物质紊乱，以及由此而产生的新陈代谢、生理、光合等各方面的复杂反应，此外，还包括形态如种子发芽率下降、芽长度减少等。因此，在选育优质高产蔬菜品种的同时，抗盐性也受到人们的关注。

豇豆是一种耐盐性中等的蔬菜，目前对豇豆耐盐性方面已经开展了形态、生理生化、分子方面的研究，但对抗性遗传方面研究甚少，且都只限于表型值的遗传分析，但对豇豆基因型耐盐遗传多样性和基因型鉴定等的研究未见报道。目前豇豆基因型耐盐能力的技术鉴定存在指标多需要测定盐害指数、株高、单株鲜重、茎粗、真叶面积、叶片数、平均净同化率、叶绿素含量、叶绿素a/b值、类胡萝卜素含量、可溶性蛋白质含量、丙二醛含量、相对膜透性、伤害率、APX活性、SOD活性、CAT活性、POD活性共18个指标但不集中、综合性差、鉴定效果不准确，不能进行耐盐预测等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方法操作简便，适应性广的豇豆基因型耐盐能力的技术鉴定方法，以解决上述问题。

本发明的技术方案为：豇豆基因型耐盐能力的技术鉴定方法，它是对培养的豇豆幼苗进行盐胁迫处理后，取其复叶叶片对幼苗叶片的株重、叶绿素、可溶性蛋白质含量、伤害率和CAT活性指标的测定，利用D＝-0.40+0.42X₃+0.11X₈+0.29X₁₁+0.31X₁₄+0.22X₁₇计算出耐盐综合评价值D，从而得到豇豆基因型耐盐能力；其中X₃、X₈、X₁₁、X₁₄、X₁₇分别代表株重、叶绿素、可溶性蛋白质含量、伤害率和CAT的SRI值，SRI＝(盐胁迫处理下性状表型值/自然条件下性状表型值)×100％。盐胁迫处理下性状表型值为盐胁迫处理后，分别是所检测到的株重、叶绿素、可溶性蛋白质含量、伤害率；自然条件下性状表型值分别是自然条件下所检测到的株重、叶绿素、可溶性蛋白质含量、伤害率。

该方法克服了传统的签定方法指标多但不集中、综合性差、鉴定效果不准确，不能进行耐盐预测等缺点。而用SRI相对比值法能较客观地反映植物的受害程度，消除品种间存在的生态发育差异。但因品种和各单项指标间的变幅不同，故用单项指标SRI值来评价品种耐盐性则结果各异。因此该方法很好的解决了豇豆耐盐能力鉴定比较困难的问题。本方法系统性、综合性强。方法操作简便，适应性广，可资其他植物耐盐能力鉴定借鉴。能判别未知豇豆基因型的耐盐性。预测豇豆种质耐盐能力的准确性高。

具体实施方式

1、上述的幼苗培养具体步骤为：用70％的酒精表面消毒2min，并用去离子水充分冲洗后，放于消毒的培养皿内湿润滤纸上，在恒温培养箱(28℃±1℃，80％相对湿度)中萌发1天，将萌动后的种子播种到装入相同重量和肥力土壤的育苗盆(9cm×15cm)内，放置温室内培养。出苗后适时均匀浇水，保证幼苗生长条件一致。

2、盐胁迫处理：培养14天后，选择生长健壮，长势一致的幼苗进行盐胁迫处理。此时长豇豆幼苗处于两片真叶期，去掉子叶，洗净根系，用黑色牛皮纸固定并水培于含有100ml营养液(pH6.5，经0.1M KOH或者0.1M HCl调节)的干净塑料杯中。营养液采用Hoagland完全配方，处理浓度为75mM NaCl(用Hoagland营养液配制，EC 2.2～2.5ms/cm)，设置4次重复，每次重复10株。培养条件为：昼夜平均温度分别为30℃和20℃，相对湿度80％，自然光照(日长13小时，日间平均光照强度180μmol·m-2·s-1)。为防止吸收和水分蒸发引起盐浓度的改变，每3天换一次营养液，每天摇动塑料杯以保证植株根系通气。

3、测定五个典型指标：在盐胁迫后的第15天早上8点，取其复叶叶片用于幼苗叶片的盐害指数、株高、单株鲜重、茎粗、真叶面积、叶片数、平均净同化率、叶绿素含量、叶绿素a/b值、类胡萝卜素含量、可溶性蛋白质含量、丙二醛含量、相对膜透性、伤害率、APX活性、SOD活性、CAT活性、POD活性共18个指标的测定。