[发明专利]从淡水鱼鱼鳞中制备未变性胶原蛋白的方法有效
申请号: | 200810048018.3 | 申请日: | 2008-06-13 |
公开(公告)号: | CN101307348A | 公开(公告)日: | 2008-11-19 |
发明(设计)人: | 李春美;万琼红;熊善柏;钟朝辉;党美珠 | 申请(专利权)人: | 华中农业大学 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;C07K1/14 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人: | 王敏锋 |
地址: | 430070湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 淡水鱼 鱼鳞 制备 变性 胶原 蛋白 方法 | ||
1.从淡水鱼鳞中提取未变性胶原蛋白的方法,其步骤包括鱼鳞预处理、脱钙、胶原蛋白提取和分离,其特征在于以下步骤:
(1)鱼鳞的预处理:将洗净的鱼鳞按重量/体积比为1∶10至1∶15加入洁净的自来水,采用电动搅拌器于20℃以下间歇搅拌,搅拌速度为2000r/min,搅拌时间为3-5分钟,用蒸馏水将所述的鱼鳞洗至表面无色素和脂肪附着,自然风干或置于<50℃温度下干燥,将所述的鱼鳞粉碎至40-50目,得到预处理鱼鳞;
(2)脱钙处理:将步骤(1)得到的预处理鱼鳞按重量/体积比为1∶10-1∶20,加入浓度为8-10%的柠檬酸或苹果酸溶液,冰水浴中用微波处理2min,所述的微波功率为200-300W,然后于10℃下脱钙处理24h,过滤分离得到脱钙鱼鳞和滤液,将所得的滤液置10℃以下静置5-10h,得到柠檬酸钙沉淀;
(3)提取分离:向步骤(2)所得的脱钙鱼鳞按重量/体积比为1∶5至1∶20加入质量浓度为1%的含质量分数为0.5-1%碱性蛋白酶的苹果酸或柠檬酸溶液,于0-10℃下提取2-4次,每次处理12-48h,提取完毕后用纱布过滤,将得到的滤液置20℃以下5000-50000g离心10-20min,取上清液,加NaCl至其终浓度为0.7-0.90mol/L,盐析过夜,5000-50000g离心10-30min,取沉淀,将所得的沉淀用0.50mol/L乙酸溶解,重复盐析1次,再将得到的沉淀用蒸馏水透析1-3d,每天更换蒸馏水2-3次,将透析液冷冻干燥,即得未变性的鱼鳞胶原蛋白。
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