[发明专利]基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp－W1蛋白及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，本发明涉及一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白，同时还涉及靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白重组的制备方法，还涉及该基因工程蛋白Acp-W1的用途，基因工程生产的靶向抗神经胶质瘤蛋白在动物模型水平上能高效抑制神经胶质瘤的增殖和转移，具有开发成抗神经胶质瘤药物的应用价值。

背景技术

脑神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，其发生率约占全部颅内肿瘤的40％，患者平均存活时间为一年。目前所有治疗措施(如：手术切除、化学治疗、放射治疗和免疫治疗等)的疗效和应用潜力都极为有限。针对这一严峻现状，迫切需要研究和开发一种有效的治疗神经胶质瘤的药物。

1995年，Ullrich发现人脑神经胶质瘤细胞表达一种独特的电压依赖的氯电流，而这种电流可以被来源于蝎毒液的氯毒素Chlorotoxin有效抑制，从而有效地降低瘤细胞增殖速度和肿瘤细胞的转移。随后，在动物模型上进一步证实Chlorotoxin可选择性抑制神经胶质瘤。因此，筛选神经胶质瘤细胞所特有的氯离子通道的抑制剂可发展成为抗神经胶质瘤的选择性靶向新药。

现代科学研究表明，蝎毒的成分具有多种生理、药理活性，对抗肿瘤、治疗风湿、抗癫痫以及心血管疾病有重要治疗作用。但是其成分相当复杂，而且成分的结构和物理化学性质相似，难以分离，许多成分所起的作用甚至相反，而且有效成分往往含量低，这些无疑都限制了蝎毒的研究和应用。特别是蝎毒氯毒素Chlorotoxin只有36氨基酸的小肽，在蝎毒中的含量非常低，从蝎毒混合物分离和纯化Chlorotoxin的产量低和成本昂贵，这严重限制了蝎毒氯毒素Chlorotoxin抗神经胶质瘤药物的研发工作。尽管采用基因工程技术可以生产大量的蛋白质，然而蝎毒氯毒素Chlorotoxin仅由36个氨基酸组成，是一个很小的蛋白质多肽，如果采用基因工程的办法生产重组Chlorotoxin，那么Chlorotoxin在受体表达菌中易于被蛋白酶降解，而且这么小蛋白的表达量不高和后期纯化困难。因此，通过人工改造蝎毒氯毒素Chlorotoxin，使Chlorotoxin与其它标签融合，形成一个较大有生物活性的融合蛋白成为了高效开发Chlorotoxin靶向抗神经胶质瘤药物研发的最佳途径。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白。该蛋白稳定性好，易于保存。

本发明的另一个目的是在于提供了一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白的制备方法。该方法简单易行，操作方便，易于生产，制备的蛋白纯度高，产量高。

本发明的再一个目的是在于提供了一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白在制备治疗或预防神经胶质瘤的药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白。通过分子生物学方法，申请人分子设计了靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白。一种分离的蛋白Acp-W1，其序列为SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。申请人发现Acp-W1蛋白以液态形式在-20℃下保存6个月以上和以干粉形式在4℃下保存12个月以上，其生物活性不变。Acp-W1蛋白稳定性好，易于保存。

本发明涉及一种基因工程靶向抗神经胶质瘤蛋白以及生产靶向抗神经胶质瘤蛋白的方法。该基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白的生产方法简单，后期纯化得率高，Acp-W1蛋白的生物活性好。

Acp-W1：MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSDLEVLFQGPLGSDDDDKMCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYRPRCLCR(SEQ ID NO：1)。

一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白的制备方法。它包括下列步骤：