[发明专利]磷酸腺苷变化情况的比值分析法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学指标分析领域，特别是磷酸腺苷的变化情况分析领域。

背景技术

常见的磷酸腺苷包括一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)，其中三磷酸腺苷(ATP)在临床上有着广泛的应用，是用于治疗进行性肌萎缩、脑溢血后遗症、心机能不全、心肌疾患及肝炎等疾病的辅酶类药物，被称为人体内的“能量货币”，目前针对ATP发展了许多专用的分析方法，主要有层析法、电泳法和光学分析法等，其目的都是为了能够定量的标定所测生化物质中ATP的含量情况，以电泳法为例，通常以0.05mol/L，pH为3.0的柠檬酸溶液作缓冲液，处理过的新华二号滤纸为支持介质，湿法点样，电压梯度18～20V/cm，电泳1.75h。电泳毕，吹干滤纸，于紫外灯照射下剪出各吸收斑点，在0.01mol/L HCl溶液浸泡1h，过滤，测定上清液A257，按照吸收系数计算出ATP含量。这些方法普遍存在流程复杂、操作繁复、操作精度要求高等问题，而在实际运用中，有大量的工作其实仅需定性的测定植物中ATP的变化情况，无须定量分析ATP的含量，传统方法在此时就更显得繁复而且成本高。

发明内容

本发明旨在解决定性分析磷酸腺苷含量变化情况中存在的技术问题，以提供一种操作简单，测定结果精准确的磷酸腺苷变化情况的分析方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

本发明的磷酸腺苷变化情况的比值分析法，包括如下步骤：

a)将作为基础组的待测植物叶片去污后测定鲜重；

b)将植物叶片置于试管中，并加入三羟甲基甲胺(Tris)缓冲液(0.5M pH7.6)，加入比例为每克植物叶片鲜重加入三羟甲基甲胺(Tris)缓冲液97～130ml；

c)将试管水浴加热5～20min，之后常温冷却10～30min，过滤得到提取液；

d)将提取液以高速离心机进一步除杂分离后，将提取液倒入比色杯中，超过1/2以上高度；

e)在波长为259nm下用分光光度计测定比色杯中提取液的吸光度；

f)将作为实验组的待测植物叶片去污后测定鲜重，重复步骤b～e，测定比色杯中提取液的吸光度；

g)以步骤f测得吸光度值除以步骤e所测得吸光度值，得到比值数据；

h)重复步骤a～g，取得至少三组或三组以上的比值数据；

i)以顺序方式排列的组号为横坐标，以步骤h所得每组组号相对应的比值数据为纵坐标，绘制曲线，从而得到磷酸腺苷变化比值的曲线图。

前述的磷酸腺苷变化情况的比值分析法，其中所述的三羟甲基甲胺(Tris)缓冲液(0.5M pH7.6)的配制步骤方法为，以蒸馏水300～500ml溶解三羟甲基氨基甲胺60.57g，加入盐酸(1N)约420ml，以盐酸(1N)或氢氧化钠(1N)调整溶液PH值至7.6，加入蒸馏水至溶液总量为1000ml，置于4℃条件下保存。

本发明的磷酸腺苷变化情况的比值分析法的有益效果：

1.流程简洁；

2.分析结果准确、直观；

3.成本低。

附图说明

图1蜈蚣草磷酸腺苷变化情况比值曲线图

具体实施方式

本发明的原理：ATP是三磷酸腺苷的英文缩写符号，它是各种活细胞内普遍存在的一种高能磷酸化合物。高能磷酸化合物是指水解时释放的能量在20.92kJ/mol(千焦每摩尔)以上的磷酸化合物，ATP水解时释放的能量高达30.54kJ/mol。ATP的分子式可以简写成A-P～P～P。简式中的A代表腺苷，P代表磷酸基团，～代表一种特殊的化学键，叫做高能磷酸键。ATP的水解实际上是指ATP分子中高能磷酸键的水解。高能磷酸键水解时能够释放出大量的能量，ATP分子中大量的化学能就储存在高能磷酸键中。因为A(腺苷)在259纳米具有光吸收，所以259纳米的光吸收可以看做为A的总量，以植物叶片为例，由于DNARNA中的A在植物叶片完整的情况下仍保留在叶内，所以此时光吸收可以看做ATP、ADP、AMP的总量。

利用基础组与实验组ATP、ADP、AMP的光吸收总量之比作为测定参数，较之将ATP单独分离出来作定量测定，可大大缩短检定流程，并可准确反映磷酸腺苷在被测物中的变化情况。

1.方法与步骤

a)将作为基础组的蜈蚣草植物叶片去污后测定鲜重(测定数据见表1)；

b)将植物叶片置于试管中，并加入15ml三羟甲基甲胺(Tris)缓冲液(0.5M pH7.6)；