[发明专利]防风多糖在制备抗肝肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体说是防风多糖在制备治疗抗肿瘤药物中的新用途。

背景技术

中药防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。中医学认为：防风性辛、甘，温。归膀胱、肝、脾经。具有解表祛风，胜湿，止痉的功效。临床用于感冒头痛，风湿痹痛，风疹瘙痒，破伤风等。

防风常常用在复方中治疗上述病症，如：防风、荆芥、葛根治风邪伤卫，有汗恶风；川芎五钱，柴胡七钱，黄连(炒)、防风(去芦)、羌活各一两，炙甘草一两五钱，黄芩三两(去皮，锉，一半酒制，一半炒)，治偏正头痛；防风、川芎、当归、芍药、大黄、薄荷叶、麻黄、连翘，芒硝各半两，石膏、黄芩、桔梗各一两，滑石三两，甘草二两，荆芥、白术、栀子各5分，治风热拂郁，筋脉拘倦，肢体焦痿，头目昏眩，腰脊强痛，耳鸣鼻塞，口苦舌干，咽嗌不利，胸膈痞闷，咳呕喘满，涕唾稠粘，肠胃燥，热结，便溺淋闭等症。

现代药学技术研究表明，防风根含3′-O-当归酰亥茅酚(3′-O-angeloyl-hamaudol)、5-O-甲基齿阿密醇(5-O-methylvisamminol、β-谷甾醇、甘露醇以及木蜡酸(lignoceric acid)为主的长链脂肪酸。尚含挥发油、前胡素(dacursin)和色原酮甙(chromone)。还含升麻素及升麻素苷等。现代药理学研究结果表明，防风具有：如下功能1.解热作用对人工发热家兔，经口给予关防风煎剂或浸剂，有明显解热作用，煎剂的作用较浸剂好。2.镇痛作用小鼠灌服防风(品种未鉴定)50％乙醇浸出液(蒸去乙醇)，能明显提高痛阈(电刺激鼠尾法)，皮下注射同样有效。3.抗菌作用新鲜关防风榨出液在体外试验，对绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌有一定抗菌作用。品种未经鉴定的防风煎剂对溶血性链球菌及痢疾杆菌也有一定的抗菌作用。4.防风醇浸膏给家兔皮下注射，对血糖无影响。5.有解热、镇痛、镇静和抗惊厥、抗炎、抗病原微生物等作用。

但是目前还没有发现有关防风多糖在治疗抗肿瘤方面的用途。

发明内容

本发明的目的是提供防风多糖在制备抗肝肿瘤药物方面的新用途。

本发明的技术方案为：防风多糖在抗人肝癌细胞株HepG-2中作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的内容作进一步说明。

实施例1

1材料与方法

1.1实验动物和肝癌细胞株

雄性新西兰家兔，体重2.0～2.5kg，人肝癌细胞株HepG-2。

1.2实验药物

防风多糖溶液。制备方法为：将1kg防风在50℃烘箱中烘12小时后将其粉碎；加入6L无水乙醇回流提取2次，每次1小时，药渣在自然条件下晾干备用；取防风药渣加一定量的水，进行提取，离心弃渣，将提取液减压浓缩至适当的体积后，加入三倍体积的95％乙醇，静置过夜，离心，收集沉淀用少量的蒸馏水溶解后装入透析袋中在流水中透析3天，透析后清液即得。

阳性对照药物五氟尿嘧啶注射液。

1.3主要试剂及仪器

DMEM培养基、新生牛血清均为美国GIBCO公司产品；MTT(Lot 921102)由华美生物工程公司提供；Bax单抗、Bcl 2单抗、P53单抗、即用型S-P法免疫组化试剂盒、DAB显色剂均由福建迈新公司提供。倒置相差显微镜为日本OLYMPUS公司产品；CO培养箱为美国SHELLAB公司产品；超净工作台由天津市医药净化设备厂生产；流式细胞仪(2000FCA)由美国BD公司生产。

1.4方法

1.4.1细胞培养：人肝癌细胞株HepG-2接种于含10新生牛血清和抗生素(100U/ml青霉素和100/，g/ml链霉素)的DMEM培养基中，培养环境为5 CO、37℃、饱和湿度。细胞培养3～5天后以0.25胰蛋白酶消化传代。

1.4.2含药血清的制备：将9只雄性家兔分为防风多糖溶液组、阳性药物对照组和空白对照组，每组3只。防风多糖溶液组以防风多糖0.05g/kg/天灌胃，阳性药物组以41.67mg/kg/天灌胃，空白对照组以1.5g/kg/天生理盐水灌胃，各组连续3天，于最后一次灌胃后2h无菌取颈动脉血，2500r/min离心20min、收集血清，采用0.2m微孔滤膜抽滤灭菌，经56。C、30min灭活以去除血清中补体，为含药血清，按组混合后置-20℃保存，临用时用DMEM培养基稀释成不同浓度。

1.4.3各组HepG-2凋亡细胞的检测：分组培养。