[发明专利]一种结核病诊断试剂及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属诊断试剂领域，涉及结核病诊断试剂及试剂盒，具体涉及含结核分支杆 菌Rv1985c蛋白的诊断试剂及试剂盒。

背景技术

结核病是当今全球面临的主要公共健康问题之一，它的病原体是结核分枝杆菌，属 分枝杆菌属。据报道，全世界每年约有800-1000万新发结核病例，每年有200-300万 人因此而失去生命。结核病已成为引起成年人死亡的头号传染病。据WHO报道，全球 三分之一的人口(约20亿)已感染了结核杆菌，如不采取措施，近10年内还将有约3 亿人受结核杆菌感染。据第四次全国流行病学调查显示，我国受结核杆菌感染人数超 过4亿，每年有13万人死于结核病，是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人 数位居世界第二。

特异性抗原诊断一直是确认病原体感染及评估感染状况较为可靠的方法，且有早 期诊断价值，已经在HBV、HCV、HIV等疾病的诊断方面获得了广泛的应用。目前，临 床结核病诊断广泛使用皮肤检测试剂：结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)。然而，结核 分枝杆菌纯蛋白衍生物存在与环境分枝杆菌以及结核病疫苗即卡介苗(M.bovis BCG) 菌株的交叉反应，其诊断价值被削弱。而血清学检测具有快速、特异、简便和廉价等 特点，因此，研制出安全简便的特异性血清学诊断试剂极为迫切。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的结核病诊断试剂，具体涉及含结核分支杆菌 Rv1985c蛋白的诊断试剂。

本发明公开了一种基于血清学方法的结核杆菌检测抗原Rv1985c蛋白。该来自于卡 介苗基因组相对结核分枝杆菌缺失的区域(RD2区)，由结核分枝杆菌基因Rv1985c所编 码的蛋白。结核杆菌Rv1985c蛋白包含303个氨基酸，分子量32.8kDa，等电点pI为 9.05。该蛋白具有序列1的氨基酸序列。

所述的Rv1985c蛋白可由结核分枝杆菌或其它少数几种分枝杆菌表达，该抗原感染 人体后或经结核杆菌感染后，能被Th细胞所识别，刺激合成B细胞生长和分化因子。 在Rv1985c抗原和B细胞分化因子的共同作用下B细胞活化和增值，并最终在淋巴器 官的T细胞区中分化成为浆细胞，并产生针对该抗原的抗体，该抗体能够特异地与 Rv1985c蛋白发生免疫反应。通常抗体存在于体液或其它介质中，包括痰液、血清、尿 液、脑髓液、肺泡灌洗液、胸腔积液等。抗体生物学实质是一类免疫球蛋白，主要分 为IgG，IgM，IgA，IgD，IgE五类，其中具有诊断价值的主要是IgG和IgM。

所述的Rv1985c蛋白能制成诊断试剂用于结核病的免疫反应检测。

本发明所涉及的可用于检测的免疫反应包括凝集实验，沉淀实验，免疫荧光实验， 小吞噬实验，E花环实验，ELISA实验，斑点免疫金渗滤实验，胶体金免疫层析法等。 典型诊断用免疫试验是酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay， ELISA)，由于大多数蛋白都可与塑料或聚酯板非特异性结合，可通过将含抗体的待测 样品与包被Rv1985c抗原的塑料板相互作用，形成的抗原抗体复合物与酶联的第二抗 体进行反应，洗去未结合的酶标抗体，加入底物后产生带有颜色的产物，在检测仪上 测得增加的光吸收值。

本发明上下文中所述蛋白除了通常所指的一种氨基酸聚合物，还应该包括其类似 物。所述类似物，是指其特性与所述蛋白相同，包括其同样可以与抗体特异性地结合。 通常包含一部分蛋白序列，代表性的是所述类似物具有相同的形状、大小、柔韧性、 电子排布等。

上述抗原的典型类似物是肽。它可与上述蛋白序列同源。这种同源肽通常具有至少 75％的同源性，优选至少90％、95％的同源性。其不同一般来自于氨基酸残基的替换、插 入、缺失和修饰，可发生在序列的N端、C端或其他任何位置上。具有代表性的是类似 物可以结合到相同的抗体分子上，且类似物中处于等价位置上的氨基酸与原始肽中的 那些抗原序列相同或保守。

所述的修饰，通常指的是天然的转录后修饰或人工修饰。修饰可提供化学部分的改 变，包括氨基、乙酰基、羟基、卤素基团和碳水化合物基团。具有代表性的是一种是 氨基酸侧链的修饰，即形成一个或多个非天然氨基酸。

所述的蛋白和多肽可以通过天然分离获得，也可以通过人工合成。一种具有代表性 的方法是用较长的融合蛋白制备上述肽段，此融合蛋白包含上述代表性的肽段序列。 所述肽也可由多肽经过物理或化学裂解所产生。