[发明专利]多氧霉素B的定量分析检测方法

权利要求书

1、一种多氧霉素B的定量分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)确立牛津杯法测定多氧霉素B的生物检测条件：平板厚度为底层培养基20mL，上层培养基5mL；培养温度为30-32℃；牛津杯的加液量为200μL；加菌层培养基的菌悬液浓度为5×10⁶cfu/ml；

(2)标准曲线的建立：在步骤(1)的生物检测条件下，取多氧霉素B的标品和样品溶于缓冲液中，用牛津杯法测定在不同浓度时抑菌圈的直径大小，并用抑菌圈直径为横坐标，多氧霉素B浓度的对数值为纵坐标，绘制标准曲线；

(3)产多氧霉素B菌株的摇瓶发酵及发酵液的后处理：将产多氧霉素B的菌株的孢子在固体培养基上培养至孢子成熟，然后将成熟孢子接种于种子培养基中，摇瓶培养后再将活化的种子接种到发酵培养基中培养并取样，最后将发酵液离心并用氯仿抽提；

(4)牛津杯法测定发酵液中多氧霉素B的含量，步骤包括：在平板上加20mL底层培养基和5mL加菌层培养基，在加有底层和加菌层培养基的平板上放置牛津杯，然后将步骤(3)中所述经氯仿抽提处理后的发酵液滴加到牛津杯中，其中牛津杯的加样量为200μL，随后将滴加抗生素的平板放入培养箱中在30-32℃下进行培养，最后用游标卡尺测量抑菌圈的直径，根据标准曲线测得多氧霉素B在发酵液中的含量。

2、根据权利要求1所述的多氧霉素B的定量分析检测方法，其特征是，步骤(3)中所述的固体培养基为YMS固体培养基，其组成部分的质量百分比为：酵母膏0.39％，可溶性淀粉0.39％，麦芽糖0.96％，CoCL.6H2O 0.0005％，琼脂1.92％，蒸馏水96.34％。

3、根据权利要求1所述的多氧霉素B的定量分析检测方法，其特征是，步骤(3)中所述的种子培养基溶液组成部分的质量百分比为：黄豆饼粉0.97％，玉米粉0.97％，葡萄糖0.97％，KH₂PO₄0.01％，NaCl 0.01％，CaCO₃0.03％，蒸馏水97.04％。

4、根据权利要求1所述的多氧霉素B的定量分析检测方法，其特征是，步骤(3)中所述的发酵培养基溶液组成部分的质量百分比为：黄豆饼粉1.89％，玉米粉1.42％，葡萄糖1.89％，KH₂PO₄0.09％，NaCl 0.09％，CaCO₃0.27％，蒸馏水94.35％。