[发明专利]促进伤口愈合的透明质酸小片段药膏的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides，o-HA)药膏的制备方法，用于促进伤口愈合。

背景技术

组织损伤与修复是目前外科领域研究的热点课题，在临床上修复障碍主要表现为愈合迟缓性皮肤伤口，如糖尿病溃疡、小腿溃疡和压迫性溃疡等，由于其发病率高，致残率高，成为临床治疗的难题之一。伤口愈合迟缓这一临床常见难治病，一直困绕着医学界，如何有效促进伤口愈合是当今医学亟待解决的热点问题。

随着对创伤愈合分子机制研究的日益深入，近年来临床上开始使用多肽生长因子治疗各种软组织损伤，并取得了良好的效果。大量动物实验和临床应用证明，基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rbFGF)可以促进急性损伤，如烧伤、供皮区、手术切口等创面愈合。对慢性难愈合创面也有明显的促伤口愈合作用。此外，血管内皮生长因子(VEGF)在多种动物模型实验中具有促进血管形成作用，进而促进伤口愈合。但是目前上述多肽生长因子均尚未进入临床应用，原因很多，其中之一可能包括这类因子均为蛋白质，直接应用于伤口局部，容易被体内蛋白酶快速分解，作用不持久。目前唯一应用于临床的促血管因子是血小板衍生化生长因子(PDGF)，作为辅助药物用于糖尿病的伤口愈合治疗。

一些中药治疗慢性创面有良好的疗效，除了内服中药以外，外用中药的应用在伤口愈合的不同阶段发挥着重要作用。然而，目前对外用中药的研究仍处于起步阶段，从药效到中药的物质基础研究正在进行初步的探索。目前外用中药对血管内皮细胞增殖的影响的文献报道尚少。

透明质酸(Hyaluronan，HA)是酸性粘多糖，由(1-3)-2-乙酸氨基-2-脱氧-β-D葡萄糖-(1-4)-o-β-D-葡萄糖醛酸双糖重复单位组成，是线型大分子聚合物，分子量约为50-200kDa。HA在体内一般与蛋白结合在一起，习惯称为蛋白多糖。糖生物学是当今生命科学中的新前沿之一。有学者预示，基因组学、蛋白组学后的时代是糖生物组学，目前，关于糖类分子的研究及开发明显落后于蛋白与核酸，已经引起医学界的重视。

HA是生物体细胞外基质结构(ECM)中含量最多的糖分子，是ECM的主要支撑结构。除此以外，已经证明HA具有非常广泛的生物学活性，参与机体各种生理及病理活动，如组织修复、血管形成、防止伤口粘连以及肿瘤转移等等。1985年，West DC等首次在“Science”上报道：HA大分子被分解成小片断后，具有强烈促血管生成作用。随后几年，陆续有报道认为透明质酸寡糖分子(Hyaluronan oligosaccharides，o-HA)在体内外条件下，可促进新生血管形成。Rooney等直接将o-HA涂抹到大鼠后背上，观察o-HA对皮肤血管促进作用，以及o-HA浸入皮肤深层的厚度。结果发现，o-HA不仅在皮肤表层直接促进新生血管形成，而且可以浸入表皮层下达800μm深度。提示o-HA如果作为外用药物，很容易浸入皮下组织。Lees等则研究了o-HA对大鼠冻伤伤口愈合中，血管运行的影响。采用Doppler流变仪及免疫组化分析手段，发现o-HA明显促进液氮所致大鼠伤口的血流运行及血管增生程度。这种寡糖片断一般为3～50mer双糖分子，其促进新生血管形成的机理目前还不清楚。

由于o-HA具有促进新生血管形成(angiogenesis)的作用，因此有不少学者开始关注o-HA与伤口愈合的关系，但是至今尚无突破，多局限于体外研究。截止目前尚无直接观察o-HA促进伤口模型愈合的报道，不排除与o-HA药物持续时间、给药剂量等难度有关。如果未来o-HA作为促血管生成药物进入临床应用，唯一要关注的是，采用必要手段，使o-HA在局部应用时，缓慢释放而避免被快速吸收。另外，o-HA的制备和鉴定方法较为复杂等因素可能是在HA与伤口愈合的研究领域中我国远远落后于发达国家的原因之一。一般来说，o-HA的制备与鉴定较为繁琐，涉及到高压液相、质谱仪等超大型设备，不仅昂贵而且复杂。

如果未来o-HA作为促血管生成药物进入临床应用，则可能成为革命性的突破。因为o-HA是消化较彻底的HA糖分子，不像蛋白类促血管生成因子(如VEGF、bFGF等)，如果局部应用不会再被消化灭活。因此o-HA有可能避免了这类蛋白性质的血管生长因子作用不能持久的弊端。另外，o-HA属于内源性因子，不易产生耐药作用。因此，一旦开发出o-HA治疗伤口的潜力，则将对临床外科伤口治疗产生巨大的影响。

发明内容