[发明专利]内皮细胞生物反应器及其制备方法和应用

权利要求书

1.植有内皮细胞的生物反应器在制备治疗重症脓毒症生物制品中的用途；

所述的植有内皮细胞的生物反应器是采用聚四氟乙烯无纺布作为内皮细胞生长的载体，联合中空纤维生物反应器，构建制成内皮细胞生物反应器；所述的中空纤维生物反应器的外壳为聚碳酸酯，中空纤维为聚砜膜，分子截留量为在50～100kD，所述的聚四氟乙烯无纺布位于所述的中空纤维外侧的间隙中，所述的内皮细胞种植在所述的无纺布上，内皮细胞的数量为3×10⁹以上；所述的内皮细胞为动脉内皮细胞。

2.按权利要求1所述的用途，其特征是所述的生物反应器通过下述方法和步骤制备：

1)内皮细胞培养

采用猪髂动脉内皮细胞于含胎牛血清和青霉素，链霉素的RPMI1640培养液中，5％CO2、37℃孵育，细胞达90％融合后，PBS洗涤，加入0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA 1∶1混合液消化，消化后1800rpm离心5min，弃上清，加入上述RPMI1640培养液，吹打为细胞悬液，传代培养；

2)制备内皮细胞生物反应器

采用聚四氟乙烯无纺布为载体的反应器，用生理盐水冲洗反应器的内腔和外腔后，将上述制得的内皮细胞悬液植入其外腔，封闭外腔口；内腔与培养液循环式人工毛细管培养系统相连接，采用步骤1）的RPMI 1640培养液进行培养，管路连接后将整个装置置于5％CO₂、37℃培养箱中孵育，制得内皮细胞生物反应器。