[发明专利]人神经突起生长素在制备创伤愈合药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和医药领域，具体地，本发明涉及人蛋白神经突起生长素在创伤愈合中的应用。

背景技术

神经突起生长素(Neuritin，NRN1)是1997年发现的一个神经营养因子，全长142aa，分子量15.3KD。主要表达于脑、肝脏、骨骼肌的卫星细胞，心脏和肺也有少量表达。以磷酯酰肌醇锚定位点(GPI)，锚定于细胞膜上，可通过磷脂酶C(PLC)的作用，从膜上脱离并以可溶的形式分布于体液中。作为一种细胞因子起作用；神经突起生长素具有很强的促进神经突起生长，突触连接及成熟的作用，用重组表达的神经突起生长素蛋白刺激原代培养的海马神经元和大脑皮质细胞，可引起神经轴突和树突明显增多延长，在爪蟾和哺乳动物视神经元突起生长的研究中，神经突起生长素也表现出相同的作用。在我们的前期研究中同样证实了神经突起生长素可以促进PC12细胞突起的生长。神经突起生长素是一个进化上非常保守的蛋白，人与大鼠的蛋白质序列100％同源，而且其表达谱也并不局限于神经系统，证明它是一个生物学功能非常重要的蛋白。特别是近两年，神经突起生长素在神经系统之外的作用逐渐被人们所认识。神经突起生长素在与骨骼肌再生密切相关的卫星细胞中呈高表达，有助于骨骼肌的损伤后修复，证明神经突起生长素能够调节细胞骨架的运动，在神经系统外也具有引导功能。

创伤愈合是一个非常复杂的过程。创伤不仅使生物体局部发生一系列变化，同时还可引发不同程度的全身性反应；在这一过程有许多细胞参与，每种细胞又分泌多种因子，这些细胞之间、因子之间、细胞和因子之间存在错综复杂的关系，因此它涉及细胞运动、粘附、通讯、增殖和分化等细胞生物学的各个方面。

发明内容

本发明的目的是提供人蛋白神经突起生长素(即人神经突起生长素NRN1，NCBI登录号为NP_057672)的新用途。

本发明提供了人蛋白神经突起生长素在创伤愈合中的应用。

本发明中，小鼠角膜实验表明，蛋白神经突起生长素可明显促进小鼠角膜处的血管生成；划痕实验表明，蛋白神经突起生长素可明显促进血管内皮细胞迁移；细胞粘附实验表明，蛋白神经突起生长素可明显增强细胞的粘附力。可见，神经突起生长素可以促进创伤处血管愈合。

本发明中，术语“神经突起生长素蛋白(NRN1)”指可促进肿瘤生长的、序列与(NCBI登陆号NP_057672)所示多肽序列至少70％同源性的NRN1多肽及其变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括人NRN1蛋白的活性片段和活性衍生物。

该多肽的变异形式包括：同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与人NRN1 DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗人NRN1多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本发明还提供了其他多肽，如包含人NRN1多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发明还包括了人NRN1多肽的可溶性片段。通常，该片段具有人NRN1多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。

本发明还提供人NRN1蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然人NRN1多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的具有代表性的多肽。