[发明专利]抗H5N1来源的血凝素蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，更具体的，本发明涉及一类抗禽流感病毒HA蛋 白的抗体。

背景技术

禽流感(avain influenza，简称AI)是由A型禽流感病毒引起的一种家禽和野 禽传染性疾病综合症。其病原禽流感病毒(avain influenza virus，AIV)属正粘病 毒科，流感病毒属，基因组为单股、负链，由8个分节段的独立RNA片段组成。

血凝素基因(HA)是禽流感病毒基因组中变异最大的基因，到目前为止，已 经发现16种不同的血凝素亚型。禽流感病毒毒株强弱主要体现在血凝素基因的 变异，高致病力毒株通常是由非致病力毒株的血凝素基因变异而来。

血凝素是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分之一，是流感病毒所有蛋白中 最重要的一个，由片段4编码，分子量为75kDa。血凝素主要功能是结合宿主唾 液酸之类的细胞受体，帮助穿透宿主的胞膜以及改变抗原性，从而逃脱宿主免 疫系统的监视。血凝素以三聚体形式与膜结合成同聚物，形成头杆状大钉子般 的结构，其变异性很强，尤其存在选择压力时，变异更快。HA变异幅度大小直 接影响着AIV流行的程度。

HA糖蛋白一级结构具有4个结构域：信号肽(前导序列)、胞浆域、跨膜域 和胞外域。N端的信号大约由16个氨基酸残基组成，其作用是识别内质网膜。 紧接信号肽之后的是328个氨基酸残基(分子是36kDa)的HA1部分，羧基端的221 个氨基酸残基(分子量27kDa)构成HA2。HA蛋白从产生到发挥作用，需要经过 两个切割加工过程：通过信号肽酶将信号肽切除，以及通过蛋白水解酶将HA 切割为HA1和HA2，两条肽链被一个二硫键连在一起，再加上分子内的一些二 硫键及其它非共价键的相互作用，使HA形成一定的立体结构。

在正常禽类和人体内不存在凝血酶蛋白，而感染禽流感病毒的禽类和人类 体内存在特异性的凝血酶蛋白，在感染者的咽、鼻拭子或含漱液、血清、粪便 以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物、其它脏器中都能检测到凝血酶蛋白 HA。对该蛋白的检测有助于早期诊断禽流感感染。

HA的临床诊断主要方法有：基于(1)免疫学原理的血清学诊断，(2)基因诊 断。核酸扩增实验需时短，但是也需要专业的人员操作和专门的实验仪器。而 现在常用的血清学诊断依赖于高特异性的抗原抗体。

现有技术中涉及到HA单抗的方法和检测形式虽然各有不同，但是这些方 法所使用的HA的单克隆抗体非常有限，它们存在的缺陷例如特异性差。因此， 通过筛选获得具有针对不同表位的鼠源单克隆抗体，以制备和开发特异、灵敏、 低成本的诊断产品以及相关方法是必须的。

发明内容

本发明的目的在于提供一类特异性抗禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的单克隆 抗体。

本发明的另一目的在于提供特异性抗禽流感病毒的检测试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种特异性抗禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的单 克隆抗体，所述的单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生：

保藏号为CCTCC NO：C200807的杂交瘤细胞株(S-98-10)；

保藏号为CCTCC NO：C200808的杂交瘤细胞株(S-145-9)；或

保藏号为CCTCC NO：C200809的杂交瘤细胞株(S-157-6)。

在另一优选例中，所述的单克隆抗体对于禽流感病毒血凝素蛋白的检测范围 (线性范围)是：10ng/ml-10μg/ml。

在另一优选例中，所述单克隆抗体的亚型IgG1，κ。

在另一优选例中，所述单克隆抗体是结合禽流感病毒血凝素蛋白的线性表位 的单克隆抗体。

在另一优选例中，所述单克隆抗体用于制备检测禽流感病毒的试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述的禽流感病毒选自：H5N1型禽流感病毒，H5N2型禽 流感病毒。

在本发明的第二方面，提供一种杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株选自：

保藏号为CCTCC NO：C200807的杂交瘤细胞株；

保藏号为CCTCC NO：C200808的杂交瘤细胞株；或

保藏号为CCTCC NO：C200809的杂交瘤细胞株。

在本发明的第三方面，提供一种检测禽流感病毒的试剂盒，所述的试剂盒含 有所述的单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的试剂盒含有：