[发明专利]一种分离小分子RNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种纯化小分子 RNA的方法及用于该方法的试剂盒。

背景技术

目前，小分子RNA——100个核苷酸或更小的RNA分子是极为引人 关注的领域，并且在分子治疗领域很有前途。这些小分子RNA主要包括 微小RNA分子(microRNA，简写做miRNA)和小干扰RNA分子(small interfering RNA，简写做siRNA)，由于这两种RNA分子都能够与靶mRNA 杂交，所以能够调节基因表达。在不同的组织、器官和不同的发育时期， miRNA和/或siRNA的表达是不同的，它们可能在各种生物发育、生理活 动、疾病发生过程中起重要的调节作用。这些小分子RNA的错误表达会 导致肿瘤、自身免疫性疾病等的发生。因此，对这些小分子RNA的研究， 尤其是对它们的定量研究将对它们的生物功能的研究起到重要推动作用。

但是，以目前广泛进行的miRNA的研究为例，无论是Northern blot、 miRNA克隆还是实时定量PCR方法，都是使用总RNA作为样品。由于成 熟的miRNA分子产生于miRNA前体，与其前体具有共同的序列，因此使 用总RNA进行研究必然导致不准确的结果。对于小分子RNA研究来说， 一个关键问题就是分离得到这些小分子RNA。因此，本领域仍需提供一种 简单高效的分离小分子RNA的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种小分子RNA的分离方法，该 方法利用分子筛的原理，利用外力使含有小分子RNA的样品通过固体支 持物，大分子物质被固体支持物所截留，小分子的RNA能够通过固体支 持物上的微孔并被收集。

为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种分离小分子RNA的方 法，该方法包括以下步骤：1)将含有小分子RNA的样品施加到固体支持 物上；2)施加外力使含有小分子RNA的样品通过固体支持物；3)收集 通过固体支持物的小分子RNA；4)使用或表征所述小分子RNA。

本发明涉及的小分子RNA，通常被理解为至多含有100个核苷酸或 更少。小分子RNA包括miRNA和siRNA分子。在本发明的一些实施方 式中，小分子RNA最多有100个核苷酸或更少，最多有70个核苷酸或更 少，或最多有30个核苷酸或更少，或最多有25、24.、23、22、21、20、 19、18、17个核苷酸或更少。在一些情况下，小分子RNA是双链的。在 另一些情况下，小分子RNA是单链的，单链的小分子RNA可以含有自互 补区域。这样的自互补区域可以是1个，也可以是多个。这些区域可包含 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多碱基对，而且这些互补可以是100 ％互补或包含一些错配，如这些区域中可包含1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10或更多碱基错配。

具体来讲，本发明方法可用于分离最长有100、95、90、85、80、75、 70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、24、23、22、21、20、19、 18、17或更少个核苷酸的小分子RNA，和从这些整数中可以引出的所有 范围。

可用于分离小分子RNA的样品包括含有这种分子的任何样品。该样 品可以是包含细胞、组织、器官或其他生物样品的物质，或者该样品可以 是反应混合物，如通过酶学、合成和/或重组方法生产的小分子RNA的混 合物。

使含有小分子RNA的样品通过固体支持物的外力包括离心力和空气 压力。所述离心力的大小为9530g～12530g，所述空气压力大小为 1200MPa～2200MPa。

在较佳的实施方案中，所述含有小分子RNA的样品为自组织中提取 的总RNA。分离时使用的固体支持物为离心纯化柱，纯化柱上的滤膜的规 格为25000～35000Dalton，优选为30000Dalton。使含有小分子RNA的样 品通过离心纯化柱的外力为离心力，离心力大小为9530～12530g，优选为 11000g。

本发明另一方面还提供了一种用于分离小分子RNA的试剂盒，该试 剂盒含有：固体支持物、按照上述分离小分子RNA的方法进行纯化的说 明书。