[发明专利]一种诱导的多潜能干细胞的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及制备诱导的多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cell， 简称iPS细胞)的方法。

背景技术

人类胚胎干细胞具有分化成人体各种类型细胞的潜能，并为再生医疗提供了应用的可能性 (Thomson JA.，Itskovitz-Eldor J.，Shapiro SS.，et al.Science.Nov 6 1998；282(5391)：1145-1147)。 然而，免疫排斥反应对于人类胚胎干细胞的移植治疗有很大影响。为了能够培养出病人特异 性的多能干细胞来消除免疫排斥的影响，人们已经尝试过很多的方法，比如成体细胞的核移 植(又称为治疗性克隆)，成体细胞与人体胚胎干细胞的融合等，但是都没有获得成功。通过 转入特定的转录因子从成体细胞诱导产生类似人胚胎干细胞的诱导的多能干细胞(iPS cell)， 建立了取得病人特异性的类似人类胚胎干细胞的诱导的多能干细胞的可能性。

最近，几个实验室通过将特定的转录因子转入人的已经分化的细胞，成功的将它们重编程 成为类似的人胚胎干细胞的多能的干细胞，他们采用了以下三种表达特定转录因子的病毒组 合，a.Oct4，Sox2，C-myc，Klf4(Takahashi K，Tanabe K，Ohnuki M，et al.Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.Cell.Nov 30 2007；131(5)：861-872)；b. Oct4，Sox2，Nanog，Lin28(Yu J，Vodyanik MA，Smuga-Otto K，et al.Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.Science.Dec 21 2007；318(5858)：1917-1920)；c.Oct4，Sox2， c-Myc，KLF4，hTert，SV40 large T(Park IH，Zhao R，West JA，et al.Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors.Nature.Jan 10 2008；451(7175)：141-146)。用以 上转录因子的组合感染人类成纤维细胞，把人类纤维细胞重编程成为类似胚胎干细胞的多潜 能干细胞，并且证明这些多潜能干细胞表达未分化的人类胚胎干细胞的表面标志物，并且能 够分化成人类胚胎的内中外三个胚层的细胞。这些实验结果使得利用人类成体细胞产生个人 特异性的胚胎干细胞，再次分化为需要类型的细胞，从而对一些疾病进行移植治疗提供了强 有力的支持，基本消除了免疫排斥的风险。三个实验室报道的效率基本相同。效率大约为从 十万个起始细胞获得十个诱导的人类多潜能干细胞，此效率还比较低。低效率会严重影响其 应用和推广。

因此，本领域迫切需要研究出高效的诱导已分化细胞转化成类似胚胎干细胞的多潜能干细 胞的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种诱导的多潜能干细胞的制备方法。

本发明的另一目的是提供一种通过该制备方法获得的诱导的多潜能干细胞。

本发明的再一个目的是提供一种包括该制备方法获得的诱导的多潜能干细胞的组合物。所 述组合物可以用于治疗相关的疾病或移植用。

本发明的第一方面提供一种诱导的多潜能干细胞的制备方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在成体细胞中导入6种转录因子：Oct4，Nanog，Sox2，Lin28，c-myc和Klf4；

(b)以胚胎干细胞培养条件培养上述分化细胞，使其形成具有胚胎干细胞形态的细胞。

上述转录因子可以以DNA、蛋白质或mRNA的形式被转移进细胞。

在具体实施例中，上述步骤(a)为将上述6种转录因子的编码序列分别克隆到载体上， 然后将这6种载体转化入成体细胞中。

上述载体为病毒载体或质粒。所述载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺病毒载体，即 上述转录因子先被包装成病毒。优选的，上述载体为慢病毒载体。