[发明专利]含有重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定水溶液

说明书

技术领域

本发明涉及融合蛋白的医用稳定制剂，尤其涉及一种含重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定制剂。

背景技术

干扰素是具有广泛生物学活性的调节蛋白质，有抗病毒、免疫调节的作用，对多种肿瘤细胞具有辅助性杀灭或抑制增殖作用，还能抑制癌基因表达从而阻止或减慢正常细胞向肿瘤细胞转化的过程。自80年代开始研制出重组人干扰素以来，目前有60多个国家批准上市。广泛用于乙肝、丙肝；白血病；疱疹、湿疣；肾癌、膀胱癌；淋巴瘤、骨髓瘤、黑色素瘤等多种病毒性疾病和肿瘤的治疗。但普通干扰素也存在某些不够理想之处，由于干扰素分子量小，易被肾小球滤过，所以皮下注射后吸收很快，半衰期短，容易被酶水解等，一般要每天注射，至少每周注射三次，应用不够方便。而干扰素治疗肝炎、肿瘤、类风湿及多发性硬化症等疾病时，治疗周期常常长达数月甚至数年，这种长期大剂量频繁用药增加了病人的痛苦和治疗费用而且易产生发烧、疲乏、食欲减退及流感样症状等毒副作用。

人血清白蛋白融合干扰素是人血清白蛋白与干扰素蛋白的融合蛋白，能显著延长干扰素体内半衰期，增强抗病毒作用，提高治疗效果，并且减少注射给药频率。人血清白蛋白融合干扰素的相关专利已在国内外公开，如美国专利US6946134、US6905688、US6926898，中国专利01124110.1、200410042814.8、200610049070.1、200610023785.X。虽然，人血清白蛋白融合干扰素比普通干扰素的稳定性有所提高，但作为蛋白类药物，其稳定性还是无法与常规化学药物相比。根据以往的重组干扰素临床使用经验，在治疗病毒性肝炎性等疾病需要3-6个月的连续给药周期。因为给药时间较长，活性药物需要有较好的稳定性。众所周知，一般重组蛋白质的稳定性比较差，在保存过程中会受到多种环境因素的影响，例如温度，湿度，氧和紫外线等都可能使蛋白发生多种物理或化学变化，造成蛋白质的聚合、分解、氧化或变性等。这些变化使蛋白质活性丧失从而降低治疗效果，并且严重的可能引起毒副作用。因此，研究出一种能稳定保存人血清白蛋白融合干扰素，并适合于实际临床使用的制剂处方是很有意义的。本发明就涉及此方面内容。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定水溶液，该水溶液可稳定保存重组人血清白蛋白融合干扰素，能够充分防止重组融合蛋白的聚集、降解、构象改变等理化性质的变化，从而保持其有效组分的生物学活性。

本发明的技术方案基于下述理论及研究：

重组人血清白蛋白融合干扰素含有39个半胱氨酸，其中38个形成19对二硫键，还有1个半胱氨酸呈还原状态，能与分子外的半胱氨酸形成二硫键从而形成共价键的聚体。研究发现，在重组人血清白蛋白融合干扰素的保存过程中，随着时间的增加融合蛋白的聚体现象也逐渐增加，生物学活性逐渐降低。所以推测聚体化现象可能是导致重组人血清白蛋白融合干扰素在保存过程中生物学活性逐渐降低的主要原因。为了防止重组人血清白蛋白融合干扰素的聚体形成，认为需要在溶液中保持一个适合的还原环境，即在溶液中添加适合的还原剂。研究发现，在含适合的pH的缓冲盐的溶液中单独添加还原性物质就能明显的提高重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定性，其对制剂稳定性的影响要超过其它的常用辅料，如表面活性剂、金属离子络合物、糖类、多元醇类、氨基酸、中性无机盐等。

基于上述理论及研究，本发明采用了下述技术方案：

一种含有重组人血清白蛋白融合干扰素的稳定水溶液的，它除了含有安全有效量的重组人血清白蛋白融合干扰素外，还含有磷酸盐和可药用的还原性物质。

上述磷酸盐在溶液或重建后的溶液中起到缓冲溶液pH值的作用。一般为无机磷酸盐。

蛋白质是两性物质，在环境的pH大于其等电点的情况下带负电荷，反之带正电荷，在极端的酸性或碱性情况下都会引起蛋白质构象的变化而导致生物学活性的丧失。重组人血清白蛋白融合干扰素的等电点在5.3左右，考虑到在等电点附近蛋白质的溶解性会下降而出现沉淀。前期的实验证明当溶液的pH小于4.5时重组融合蛋白会出现降解的现象，而pH在碱性状态下有利于半胱氨酸氧化形成二硫键。根据上述现象，优先pH范围为6.5-7.5。