[发明专利]高速逆流色谱法制备高纯度扁蒴藤素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用高速逆流色谱法(HSCCC)制备高纯度扁蒴藤素的方法。

背景技术

南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thumb)是我国民间常用的一种植物药， 有驱风除湿，活血解毒消肿功效，主治筋骨疼痛、四肢麻木、风湿性关节 炎、腰腿痛、闭经、小儿惊风、痧症、痢疾、肿毒、跌打损伤(守立人.现 代中药学大辞典(下册)[M].北京：人民卫生出版社.2001.1457)。南蛇藤 主要药用成分有倍半萜及倍半萜衍生物、生物碱、三萜、黄酮等四类物质， 其中三萜类成分主要存在于南蛇藤属植物的根皮中，主要类型有羽扇豆烷 型和齐墩果酸型。扁蒴藤素(Pristmerin)是药理活性很强的五环三萜类化合 物，具有显著的抗肿瘤、抗炎活性。

扁蒴藤素在体外的抗癌活性筛选中，对P₃₈₈(IC₅₀为0.267μg/mL)及 LAX细胞(IC₅₀为0.018μg/mL)有很强的抑制作用(蒋毅等.南蛇藤活性成 分的研究.中草药1996；27(2)：73)。扁蒴藤素在体外对HL-60细胞 的生长有明显抑制作用，处理时间在24～72h时抑制率与浓度呈正相关， IC₅₀分别为1.79、0.39、0.72和0.83ml/L。对Fe²⁺-抗坏血酸诱导的大鼠心、 肝、肾组织匀浆MDA生成均有明显抑制作用，说明扁蒴藤素既有抗氧化 作用，也有抗肿瘤作用(陈长瑞，李文广等.扁蒴藤素的抗氧化与抗肿瘤 作用[J].中药药理与临床，2002；18(5)：20-21)。扁蒴藤素还有抗疟作用 (Katchrinnee Pavanand，et al：Schizontocidal activity of Celastrus paniculatus Willd Against plasmodium falciparumin vitro，Phytotherapy Research 1989；3(4)：136～139)。扁蒴藤素腹腔注射0.156～0.625mg·kg^-1或 肌肉注射1～4mg·kg^-1明显抑制小鼠耳肿和足肿(P＜0.05)；肌肉注射2～4 mg·kg^-1明显抑制小鼠毛细血管通透性增高(P＜0.05)；肌肉注射1～2mg·kg^-1抑制大鼠腹膜炎白细胞渗出、蛋白质渗出及NAG释放，降低NO含量， 抑制MDA生成，增强SOD及CAT活性。扁蒴藤素表现出明显的抗炎作 用；抗炎作用可能与其抑制NO生成、清除氧自由基、抗脂质过氧化、稳 定溶酶体膜有关。

扁蒴藤素药理活性，特别其抗肿瘤活性非常显著，自然界中含量低， 且容易混有杂质。经过HPLC测定，发现扁蒴藤素在南蛇藤根皮部位含量 很高，超过1％，利用此方法可以简单的从南蛇藤根皮粗提物中得到量多、 高纯度扁蒴藤素。文献报道了用柱层析方法得到扁蒴藤素单体的方法(蒋 毅等.南蛇藤活性成分的研究.中草药1996；27(2)：73)：南蛇藤根 1500g，粉碎，用石油醚提取3次。浓缩提取液得7.22g半固体状物。通过 低压硅胶柱层析分离，以不同比例的石油醚-乙酸乙酯洗脱，得到单体扁蒴 藤素。但该方法操作步骤繁琐，过程中损失大，从而回收率低。

高速逆流色谱(High Speed Countercurrent Chromatography，简称 HSCCC)是国际上于上世纪80年代以来在液-液分配色谱基础上发展起来 的新型分离技术，其分离原理是利用螺旋柱在高速行星运动时产生的巨大 离心力，使螺旋柱中互不相溶的两相不断混合，达到稳定的流体动力学平 衡态，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂都反复进行着混合和静置的 分配过程，这一过程频率极高，当柱心以800rpm旋转时，频率超过每秒13 次。流动相不断地穿过固定相，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流 泵连续输入另一相(流动相)，流动相载着溶质(样品)进入螺旋柱并不断反复 穿过固定相，使样品在两相之间也不断反复地进行分配，由于样品中各组 分在两相中分配系数不同，导致在螺旋柱中的移动速度不同，因而能使样 品各组分按分配系数的次序，依次得到分离。