[发明专利]一种在同一只大鼠体内建立多种疾病模型的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，具体涉及一种在同一只大鼠体内建立多种疾病模型的方法。

背景技术

冠心病、脑中风、高血脂、高血糖、风湿性关节炎等疾病严重危害着人类健康，患病人群呈现逐步增多的趋势。采用动物模型进行新化合物的活性筛选是新药开发中常用的方法，系统全面的评价药物在一种或者多种适应症的生理活性是药物临床应用的基础。由于新药开发的成本不断增加、时间逐步增长，在一定程度上制约了新药开发的进程。目前，在新药开发的前期过程中，采用细胞水平的大规模筛选已应用广泛，但因体内、体外生理环境的差异，使细胞水平的实验结果并不能有效、准确地说明化合物的适应症。目前文献报道单一的动物模型很多，例如心肌缺血动物模型、脑缺血动物模型、高血糖动物模型、高血脂动物模型、风湿性关节炎动物模型等，但在研究中，由于往往只能采用单一模型进行药物在体研究，因而，耗时长，动物使用数量多，成本高。另外，一次实验只能判断化合物的一种适应症，并且与一般临床疾病患者病症和并发症并存的情况不符。因此，单一的动物模型不能满足新药开发的需要，因此，建立在一只动物体内多种疾病的实验动物模型，成为研究的新目标，这样，不但可以有效快捷的筛选化合物的药效及其机理，发现目标化合物潜在的新的临床适应症，而且能降低成本，减少动物使用的数量。

本发明要解决的技术问题是在一只动物体内建立多个疾病的动物模型，它和人类疾病及其并发症状况相似，能够有效筛选化合物的药效和作用靶点，耗时短，动物使用量少，成本低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是在同一只动物体内建立多个疾病的动物模型，它和人类疾病及其并发症状况相似，能够有效筛选化合物的药效和作用靶点，耗时短，动物使用量少，成本低。

本发明提供了一种在同一只大鼠体内建立多种疾病动物模型的方法。

本发明提出的在同一只大鼠体内建立多种疾病动物模型的方法通过以下方案实现：

(1)建立大鼠高血脂模型；

(2)在(1)中的大鼠上建立高血脂和风湿性关节炎模型；

(3)在(2)中的大鼠上建立高血脂和风湿性关节炎并高血糖模型；

(4)在(3)中的大鼠上建立高血脂和风湿性关节炎并高血糖及心肌缺血模型；

(5)在(4)中的大鼠上建立高血脂和风湿性关节炎并高血糖及心肌缺血又脑缺血模型。本发明在在一只大鼠体内建立多种疾病动物模型的方法的具体步骤如下：

(1)建立大鼠高血脂模型

选取无特殊病原体的Wistar大鼠，雄性，160±10g，适应无特殊病原体级动物实验室环境(温度20-26℃、日温差≤3℃、相对湿度40-70％、换气次数10-15次/小时、气流速度，0.1-0.2m/s、压强梯度20Pa、空气洁净度10000级、落下菌数个≤3/皿、氨浓度≤14mg/m³、

噪声≤60dB、照度150～3001x、昼夜明暗交替时间12/12h)3天，实验前1天，称体重，禁食不禁水12小时，眼眶后静脉丛取血测定血清中总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白含量；选择血脂合格(总胆固醇在1.5-2.5mmol/L之间、甘油三酯在1.0-2.0mmol/L之间)的大鼠分为正常组和模型组，将普通饲料(水分7.42％、粗蛋白22.35％、粗脂肪5.68％、粗灰分5.16％、粗纤维7.24％、钙1.24％、磷0.89％、水溶性氯化物0.40％)放入正常组大鼠鼠笼盖上，大鼠自由食用，将高脂饲料(8％蛋黄粉、1.5％胆固醇、10％猪油、0.1％胆盐)放入模型组大鼠鼠笼盖上，大鼠自由食用30天，并采用试剂盒测定血中总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇的含量，并以模型组和正常组血脂水平比较有统计学上的显著差异(P＜0.05)为造模成功的标准。

(2)在完成(1)步骤后的大鼠中建立高血脂和风湿性关节炎模型

在完成(1)步骤后的模型组大鼠右足掌皮内注射10mg/ml的Freund′s佐剂，连续观察8天，并测定正常组和模型组大鼠足肿胀的厚度，并以模型组大鼠足掌厚度和正常组大鼠比较有统计学上的显著差异(P＜0.05)为造模成功的标准。

(3)在完成(2)步骤后的大鼠中建立高血脂和风湿性关节炎及高血糖模型

在完成(2)步骤后的正常组和模型组大鼠均禁食24小时，于模型组大鼠腹腔注射50mg/kg链尿菌素，测定大鼠血糖的含量，以模型组大鼠血糖值和正常组大鼠血糖值比较有统计学上的显著差异(P＜0.05)为造模成功的标准。