[发明专利]尖海龙中抗肿瘤活性蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种医药技术领域的蛋白产品，具体的说，是涉及一种尖海龙中抗肿瘤活性蛋白。

背景技术

尖海龙Syngnathus acus Linnaeus为-常用中药材，收载于2005版《中华人民共和国药典》，具有软坚散结、补肾壮阳之功效，用于癥瘕积聚、瘰疬痰核、跌扑损伤、阳萎遗精、痈肿疔疮。

经对现有技术的文献检索发现，李士敏等在对海龙类药材的体外抗肿瘤活性研究中发现，尖海龙的脂溶性部分具有抑制人癌肿瘤细胞株KB细胞的作用。(李士敏，吴筱丹，曾苏，等.海龙体外抗肿瘤活性研究[J].中国中药杂志，2001，26(3)：198-201)，该文献公开的为尖海龙中具有抗肿瘤活性的脂溶性成分，并不涉及水溶性的活性蛋白。李春香等报道尖海龙水提取物对Hela、SK-RB-3细胞的增殖具有很强的抑制抑制作用(李春香，边洪荣，邹国林，等.尖海龙提取物抗癌作用的研究[J].武汉大学学报(理学版)，2001.47(6)：761-765)，该文献虽报道了水溶性成分，但仅为粗提物，并未涉及提取物的组成，更未涉及其中的抗肿瘤活性蛋白类成分。李晓波等发明了一种粗吻海龙抗肿瘤蛋白(李晓波，张朝晖，秦孙星，等.海龙抗肿瘤蛋白，中国专利，专利号：ZL 200510112235.0)。该发明是粗吻海龙抗肿瘤蛋白，其分子量为55kDa，与本发明明显不同。

目前尖海龙仍以全体入药，用于跌打损伤和阳痿遗精的治疗，文献检索未见关于尖海龙抗肿瘤活性蛋白的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种尖海龙中抗肿瘤活性蛋白，使其具有抗肿瘤活性，同时有低毒的特点。

本发明是通过以下技术方案实现的。本发明是一种以尖海龙为原料提取的分子量为60kDa的抗肿瘤活性蛋白。

本发明抗肿瘤活性蛋白是尖海龙先经水提、硫酸铵盐析、再经离子交换层析及凝胶过滤层析制得，其组成是分子量为60kDa的纯蛋白，蛋白的含量为100％。

本发明所提供的尖海龙抗肿瘤活性蛋白外观为白色粉末，SDS-PAGE显示为单一条带，HPLC显示为单一峰，为一纯蛋白。

本发明所提供的尖海龙抗肿瘤活性蛋白，经测试具有良好的抗肿瘤活性：小鼠及人癌细胞株给药剂量在0.1-100g/ml范围内可抑制多种肿瘤细胞的生长；小鼠给药剂量在1-100mg/kg范围内可抑制动物体内移植肿瘤的生长，同时可以显著改善荷瘤小鼠体征性状。本发明单独或与其它抗肿瘤药物联合使用均有抗肿瘤作用，用于各种癌症的治疗和辅助治疗，如：肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、白血病等，尤其对A-549、CCRF-CEM、LOVO、P388细胞株有较强抑制作用。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

从尖吻海龙中纯化以下实施例所述的抗肿瘤活性蛋白，具体如下：

(1)以尖海龙为原料，粉碎后过筛，待用。

(2)在尖海龙粗粉中加入6-12倍量的蒸馏水，匀浆、低温浸泡8-16小时，离心后取上清液，即为海龙蛋白粗提液。

(3)将蛋白粗提液于40-50℃减压蒸发浓缩，加入硫酸按粉末使硫酸铵浓度达到55％-85％饱和度，充分搅拌后4℃静置，离心，收集沉淀，将沉淀用少量蒸馏水溶解后透析、浓缩、冷冻干燥，即得到尖海龙粗蛋白。

(4)将尖海龙粗蛋白用pH8.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解后，进行离子交换层析，用含0、0.1、0.2、0.3和0.5mol/L NaCl的pH8.4、20mmol/LTris-HCl缓冲液进行梯度洗脱，紫外检测仪于280nm波长处检测，得到数个不同浓度NaCl缓冲液的洗脱组分，其中0.3mol/L NaCl缓冲液洗脱部分经透析、浓缩、冻干后，即为海龙抗肿瘤粗蛋白。

(5)将海龙抗肿瘤粗蛋白用pH8.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解，进行凝胶过滤层析，用pH8.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液洗脱，紫外检测仪于280nm波长处检测，收集第一个洗脱峰，经透析、浓缩、冷冻干燥后，即获得尖海龙抗肿瘤活性蛋白。

实施例1

本实施例所提供的尖海龙抗肿瘤活性蛋白，外观为白色粉末。