[发明专利]一种从动物胆汁中提取胆汁酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从动物胆汁中提取胆汁酸的方法。

背景技术

中世纪以来，各国都致力于胆汁的成分生化代谢和生理病理方面的尖端试验性研究。研究表明：动物胆汁中的胆汁酸中的鹅脱氧胆酸和熊脱氧胆酸具有有效的溶石作用；胆汁酸具有抑制、杀伤和溶解敏感性细菌的作用，如肺炎双球菌和链球菌。但只有高纯度和较高浓度的胆汁酸才具有杀菌作用，稀浓度的胆汁酸仅具有抗菌作用。

目前，制备胆汁酸主要有化学合成法和天然胆汁提取法两类。目前公开的从天然胆汁中提取胆汁酸的方法存在操作复杂，纯度较低，收率较低，试剂消耗量大，成本较高，难以应用于工业化等缺点。

1.Haslewond，G.A.D等(Studies in bile acids，Biochem.J，1950，47，584-590)和Wiggins，H.S.等(Studies in bile acids，Biochem.J，1958，70，349；Biochem.J，1953，55，293)公开了两种从胆汁中提取胆汁酸的方法：

方法一：将胆汁与其2倍体积量的乙醇混和，静置24小时，过滤后蒸干。

方法二：将胆汁用一定量乙醇不断提取，直至醇提取液中呈无色，直至全部蛋白沉淀除去，合并提取液蒸干成粉。

上述两种方法的缺点在于：虽然能将胆汁中的全部蛋白除去，但胆汁酸中仍保留胆固醇和中性脂肪，因此产品纯度较低。

2.专利文献CN 85 1 04111A(公开日1986年7月16日)公开了一种从胆汁中提取胆汁酸的方法：将胆汁过滤后用NaOH调至碱性，加热水5小时，滤液用HCl酸化，沉淀物用水洗至中性，干燥，磨粉。该方法的缺点在于：用酸碱处理胆汁，特别是碱性溶液可降低氨基酸结合胆汁酸的活性(呈游离胆汁酸)，且产品中含有胆固醇、中性脂肪和蛋白质，纯度不高，得率较差。

3.Leslie等(Clin.Chim.Acta，1969，24，253-259；Gut，19710，11，126-130)公开了一种从胆汁中提取胆汁酸的方法：将十二指肠胆液与5倍量甲醇混和，于37℃保温5-10分钟，离心后，沉淀用1-2倍量甲醇提取二次，合并甲醇提取液蒸干呈粉，再用2倍量石油醚(40-60℃)抽提，除去脂质和胆固醇。该方法的缺点在于：甲醇用量大，胆汁酸呈干粉后用石油醚抽提操作麻烦，也不能将胆固醇和脂质全部抽除。

4.Larusso等(Gastroenterology，1975，69，1307-1320)公开了一种从胆汁中提取胆汁酸的方法：将胆汁加10倍量95％乙醇，加热沉凝蛋白，过滤后，提取液加水0.5倍量，调节pH至中性，然后用2倍量石油醚提取3次，最后将乙醇提取液蒸干，呈粉末。该方法的缺点在于：乙醇和乙醚用量太大，操作麻烦，石油醚与乙醇分界面层次不清晰，很难掌握，会出现误差，成本太高。

5.Setchell等(Gastroenterology，1997，112，No.1)公开了一种从胆汁中提取胆汁酸的方法：将肝组织(10-100mg)加水20ml，捣成匀浆，加甲醇7倍量(最终浓度为80％)，然后超声波处理20分钟，回流2小时，过滤后沉淀，用1∶1等量氯仿和甲醇抽提，过滤液合并后，用旋转式蒸发器蒸干，得肝胆汁酸粉末。该方法的缺点在于：：操作复杂，甲醇用量大，以氯仿和甲醇抽提胆固醇时分层不清晰，很难掌握，易出现误差，很难达到分离胆固醇和脂质的目的，成本太高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的从胆汁中提取胆汁酸的方法操作复杂，纯度较低，收率较低，试剂消耗量大，成本较高，难以应用于工业化的缺陷，而提供一种操作简便，条件温和，试剂消耗量较低并可回收使用，产品纯度高，收率高，易应用于工业化生产的胆汁酸的提取方法。

本发明的方法包括如下步骤：

(1)将新鲜胆汁用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁0.8～1.2倍体积量(更佳的为等量)的水混匀，再加入新鲜胆汁2～3倍体积量的甲醇或乙醇混匀，静置；

或者将新鲜胆汁与其0.8～1.2倍体积量(更佳的为等量)的水混合，再用真空冷冻干燥法制成干粉，再加入新鲜胆汁0.1～0.2倍体积量的水混匀，再加入新鲜胆汁1～2倍体积量的甲醇或乙醇混匀，静置；

(2)离心后取上清液或者过滤后取滤液，调pH值至7～9，加入上清液或滤液0.4～0.6倍体积量的水和其1.5～2倍体积量的氯仿混匀，静置分层，分出上层溶液，将其干燥制成粉。