[发明专利]猪蓝耳病病毒RT－PCR快速检测试剂盒

权利要求书

1.一对猪蓝耳病病毒(猪繁殖与呼吸综合征病毒，porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV)特异性检测引物Primer P1/P2，其序列为：

Primer P1：5’-CACTACGGTCAACGGCACAT-3’

Primer P2：5’-CCACAGTGTAACTTATCCTCCCT-3’

其中Primer P1/P2引物对在猪蓝耳病病毒核酸中特异性扩增出402bp的产物。

2.利用权利要求1所述引物组成的猪蓝耳病病毒快速检测试剂盒，其特征为：

采用RNA快速提取方法提取待检组织样品的RNA核酸，按如下RT-PCR反应体系和扩增程序，用Primer P1/P2引物对进行猪蓝耳病病毒的RT-PCR扩增检测。

RT-PCR体系：AMV/Tfl 5×Reaction Buffer 2.5μL，25mM/L MgSO₄1μL，10mM/L dNTP 0.5μL，AMV Rever Transcriptase 2.5u，Tfl DNA Polymerase 2.5u，20uM/L Primer P1 1μL，20uM/LPrimer P2 1μL，待检RNA模板5μL，加水至总体积25μL。

RT-PCR扩增程序：45℃逆转录45min；94℃预变性2min；94℃30s、55℃45s、68℃45s，35个循环；最后68℃延伸8min。4℃保存。

电泳检测：取8μLPCR产物，混合1μL上样缓冲液，1～1.5％的琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，以DNA分子量Marker为参考。

结果判断：在阴性对照无条带、阳性对照有明显402bp条带的前提下，样品出现402bp大小条带定为猪蓝耳病病毒核酸阳性，否则判为阴性。