[发明专利]能抑制肿瘤细胞生长和转移的饰胶蛋白及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种既能抑制肿瘤细胞生长和转移的饰胶蛋白(Decorin)及其制备方法和在抑制肿瘤生长和转移中的应用。

背景技术

最近表皮细胞生长因子受体家族新成员HER-2/neu(c-ErbB-2)癌基因在乳腺癌的发生发展中所起的重要作用引起病理学家和临床医学家的高度关注。HER-2/neu基因定位于人17号染色体，编码一185KD的跨膜糖蛋白，即表皮生长因子-2受体(HER-2)。与表皮生长因子受体家族(EGFR)其它成员一样，HER-2具有酪氨酸激酶活性，介导细胞的生长与分化信号的传导。HER-2可以单体、同源或异源二聚体的形式存在于细胞膜，以异源二聚体的酪氨酸激酶活性为最强。在正常细胞表面，HER-2表达甚微，几乎无异源二聚体存在；因而介导促生长信号的能力亦相对微弱。但HER-2在许多肿瘤细胞则以异源二聚体的形式高水平表达，进而形成强烈的促生长信号。有证据提示HER-2/neu过度表达与乳腺癌的发生、发展及转移密切相关。动物实验发现HER-2/neu在转基因小鼠乳腺上皮表达可诱发转移性肿瘤。临床研究表明：约20～30％的浸润性乳腺癌患者的乳腺癌细胞HER-2/neu明显上调，HER-2高度表达，而且转移灶与原发灶癌细胞的表达水平一致；凡高水平HER-2表达的浸润性乳腺癌病例，对常化疗不敏感、预后不良、容易转移、死亡率高。Herceptin是一新近被FDA批准进入III期抗乳腺癌临床实验的重组人HER-2单克隆抗体。其临床前研究表明：Herceptin通过直接阻断HER-2的胞外段，可明显抑制HER-2表达阳性的乳腺癌细胞生长。临床多中心实验表明：Herceptin与化疗药联合，可明显提高治疗反应率，延缓病程，增加生存期。以上证据支持HER-2可作为新的特异性治疗浸润性乳腺癌的靶点(M.J.Duffy Biochemicalmarkers in breast cancer：which ones are clinically useful Clinical Biochemistry2001；34：347-352)。

小分子富亮氨酸蛋白糖甙家族成员饰胶蛋白(Decorin)因被证实是一强的肿瘤细胞生长负性调节因子而成为肿瘤研究领域的热点。Decorin由核心蛋白及其以共价键相连的氨基糖甙链组成，未成熟肽含有359个氨基酸。内源性Decorin在血管、结蒂组织和某些肿瘤等组织表达，尤以急性损伤组织的上皮下层表达甚强。在肿瘤组织，Decorin由其两种主要支架细胞：成纤维细胞和平滑肌细胞分泌产生并高浓度聚集于肿瘤细胞间的基质中。作为EGFR天然配体，Decorin通过与EGFR相互作用，抑制肿瘤细胞生长、浸润和远距离转移。Decorin对肿瘤细胞生长的负性调节作用以及高度浓集于肿瘤细胞侵及的微环境的特性，实际上是宿主天然抗肿瘤免疫功能的体现(Marko Stander，UlrikeNaumann and Wolfgang Wick Transforming growth factor-beta and P21：multiplemolecular targets of decorin-mediated suppression of neoplastic growth Cell TissueRes 1999；296：221-227；Renato V.Iozzo，David K.Moscatello，David J.McQuillanet al.Decorin is a biological ligand for the epidermal growth factor.The Journal ofBiological Chemistry 1999；274(8)：4489-4492)。Manoranjan等用重组Decorin转染HER-2高表达的乳腺肉瘤细胞MDA-453，使该细胞HER-2的表达量降低约40％，其酪氨酸激酶的活性几乎完全丧失，内源性P21蛋白(一种强的细胞周期素依赖激酶抑制因子)活性增强，进而细胞持续处于周期停止、生长延迟的抑制状态。裸鼠实验显示Decorin转染HER-2高表达的乳腺肉瘤细胞MDA-453不能诱导肿瘤形成。因此，Decorin被认为是作为一种EGFR天然特异性拮抗剂，能安全有效地抑制HER-2高表达的肿瘤细胞(Manoranjan Santra，Inge Eichstetter and Renato V.Iozzo An anti-oncogenic role for Decorindown-regulation of ErbB2 leads to growth suppression and cytodifferentiation ofmammary carcinoma cells.The Journal of Biological Chemistry 2000；275(45)：35153-35161)。