[发明专利]一种蜡蚧轮枝菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蜡蚧轮枝菌菌株及其在防治害虫方面的应用。

背景技术

在烟粉虱、温室白粉虱、蚜虫和蓟马等害虫的防治上，多采用传统的化学防治方法。

蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii(Zimmermann)Viegas)是一种昆虫病原真菌，作为一种活体生物农药，具有不同于现有化学杀虫剂的全新作用机理、对环境无污染、无残留的特征，可以作为防治某些对苏云金杆菌(Bt)产生抗药性的昆虫，替代传统化学防治药物，以大力发展生物农药防治技术。

发明内容

本发明的一个目的是克服现有技术的不足，提供一种蜡蚧轮枝菌菌株。

本发明的另一个目的是提供所述蜡蚧轮枝菌菌株的应用。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

提供一种蜡蚧轮枝菌菌株，所述菌株是从广州地区被虫生真菌自然侵染的烟粉虱虫体上分离获得，并回接于烟粉虱虫体上复壮获得蜡蚧轮枝菌菌株，对该菌株采用单孢子分离获得纯化菌株。该菌株为VL-N6，菌株保藏号为：CCTCC No：M208086，2008年6月10日在中国典型培养物保藏中心保藏。

所述蜡蚧轮枝菌菌株属丝孢目，轮枝孢属。

所述蜡蚧轮枝菌菌株菌落白色至奶油色，薄絮状，背面无色至深浅不一的黄色。分生孢子梗不发达，似营养菌丝，其上有单生、对生或3～4个轮生的瓶梗，瓶梗纤细，大小因菌株及菌龄不同而差异较大，8.5-40×0.8-2.2μm；分生孢子椭圆形至圆柱形，两端圆，单生，在瓶梗顶部聚集成头状，大小因菌株及而变异较大，2.3-10×1-2.6μm。

本发明同时提供了所述蜡蚧轮枝菌菌株在制备防治烟粉虱、温室白粉虱、蚜虫或蓟马的药物方面的应用，本发明的蜡蚧轮枝菌对防治十字花科蔬菜上的烟粉虱、温室白粉虱、蚜虫或蓟马等多种害虫有效。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：(1)本菌株是从广东省广州地区被侵染的烟粉虱虫体上分离获得，为中国本土的菌株，并非从国外引进，能较好地适应本地的自然环境。(2)本发明所述的蜡蚧轮枝菌菌是一种昆虫病原真菌，作为一种活体生物农药，具有不同于现有化学杀虫剂的全新的作用机理、对环境无污染、无残留的特征，适应有机食品生产的要求。(3)本发明的蜡蚧轮枝菌对防治十字花科蔬菜上的烟粉虱、温室白粉虱、蚜虫和蓟马等多种害虫有效。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明。下述实施例为本发明较佳的实施方式，本发明主要阐述所述菌株的发明思想，实施方式不一一在实施例中追述，但并不因此限制本发明，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，应为等效的置换方式，包含在本发明内。

实施例1

1.1材料来源

在广州地区的蔬菜黄瓜上采集到一种被虫真菌侵染的烟粉虱Bemisia tabaci虫尸。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：将200g马铃薯煮熟取汁，然后在所取的汁液中加入20g葡萄糖和17～20g琼脂粉，加入水使总体积为1000ml并煮沸，经高压灭菌，灭菌条件121℃，30min。

无菌操作条件：所有器皿和用具须经高压灭菌，灭菌条件121℃，30min，接种等操作均在实验室常规规定的超净工作台内进行。

培养条件：置于25℃光照(14L∶10D)恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到PDA斜面，再转入4℃冰箱贮存。

1.2病原菌的分离、鉴定

(一)病原菌的分离与纯化

(1)分离

从采回的被虫生真菌感染的烟粉虱虫尸样品上分离病原菌。利用5％的次氯酸钠溶液对样品进行表面消毒，消毒后的样品在灭菌水中洗涤3次，并放入PDA平板中，倒置于25℃恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到PDA斜面，再转入4℃冰箱贮存。

(2)复壮

将分离到的菌株在PDA平板上培养15天，待产生分生孢子后加入0.03％吐温-80的无菌水收集孢子，将孢子悬浮液在磁力搅拌器上搅拌20分钟，用小型手动喷雾器将稀释成1×10⁷孢子/ml的孢子悬浮液均匀地喷于带有烟粉虱的黄瓜叶片上，保温90％以上，24小时。15天后挑取被感染的烟粉虱，按前面所述的方法分离到A分离株。

(3)纯化