[发明专利]老年性痴呆重组蛋白疫苗及其制备方法

权利要求书

1、一种老年性痴呆重组蛋白疫苗，为重组多价Aβ_1-15蛋白疫苗，所述Aβ_1-15氨基酸序列为：

Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln

Aβ_1-15氨基酸序列间采用柔性连接肽连接形成多价Aβ_1-15。

2、根据权利要求1所述的一种老年性痴呆重组蛋白疫苗，其特征在于所说的柔性连接肽的序列为Gly-Gly或Gly-Ser-Ser-Gly。

3、根据权利要求1或2所述的一种老年性痴呆重组蛋白疫苗，其特征在于所说的Aβ_1-15氨基酸序列为四价，即4×Aβ_1-15。

4、根据权利要求1或2所述的一种老年性痴呆重组蛋白疫苗，其特征在于蛋白疫苗中以MF59为佐剂。

5、如权利要求1所述的一种老年性痴呆重组蛋白疫苗的制备方法，包括如下步骤：包括以下步骤：

(1)合成多条寡核苷酸引物，通过基因扩增得到的两个或两个以上含有柔性连接肽基因的二价Aβ_1-15基因片断；Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Gly-Gly-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Gly-Ser-Ser-Gly(2×Aβ_15-1)和

Gly-Ser-Ser-Gly-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Gly-Gly-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln(2×Aβ_15-2)；

(2)将两个或以上含有柔性连接肽基因的二价Aβ_1-15基因片断依次克隆入pQE-30原核表达质粒中，制备重组质粒pQE-4×Aβ₁₅；

(3)将重组质粒pQE-4×Aβ₁₅分别转化入表达菌M15[pREP4]，IPTG诱导表达4×Aβ₁₅重组蛋白；

(4)将表达的4×Aβ₁₅重组蛋白经his-tag Ni²⁺亲和纯化树脂纯化后，透析获得高纯度的4×Aβ₁₅重组蛋白；

(5)将高纯度的4×Aβ₁₅重组蛋白与佐剂等体积充分乳化混合后制备成4×Aβ₁₅重组蛋白疫苗。