[发明专利]一种用于氨基酸分析的烟草提取液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体涉及一种用于氨基酸分析的烟草提取液的制备方法。 

背景技术

氨基酸是烟叶中的重要组成部分，是与烟气香味、卷烟品质和品牌特征密切相关的烟草成分，氨基酸参与烟叶中的非酶棕色反应，即美拉德反应，此反应可产生多种重要的致香成分。因此，测定烟草中的氨基酸对配方研制、工艺生产和品质控制都有十分重要的意义。 

由于烟草中的氨基酸种类较多，且具有酸性、中性和碱性三种不同的化学性质，加上烟草基质复杂，因此对烟草中多种氨基酸的同时测定具有一定难度。目前，液相色谱(LC)法是较多使用的氨基酸测定方法之一。由于氨基酸不具有紫外和荧光检测所需的发色基团，若用液相色谱法进行检测，则必须对氨基酸进行柱前或柱后衍生。衍生化操作步骤繁琐，耗时耗力，而且衍生化合物的稳定性难以直观的评判，某些氨基酸衍生反应的完全程度也难以保证，同时衍生反应还可能生成非目标衍生物，这些都会影响氨基酸的准确测定。自动氨基酸分析仪也存同样的衍生问题。 

烟草成分相当复杂，用LC、自动氨基酸分析仪、离子色谱(IC)和毛细管电泳(CE)等方法进行氨基酸分析往往需要对样品进行固相萃取等繁杂的前处理，以减少干扰。现有的固相萃取等前处理会在一 定程度上造成某些氨基酸(或氨基酸衍生物)的损失，而且有些干扰杂质也难以通过前处理消除。 

近年来，随着电喷雾离子化(ESI)和串联质谱(MS/MS)技术的发展，液相色谱和电喷雾串联质谱联用(LC-ESI-MS/MS)在复杂化合物分析中得到广泛的应用。LC-MS/MS方法的灵敏度高，选择性优异。由于MS/MS具有特征离子提取功能，与色谱方法相比，对待测物的色谱分离度要求并不难么严格。LC-MS/MS法可同时实现对多种氨基酸的分离提取以及物质确证，可有效的解决共流出问题，无需对样品进行衍生化和固相萃取等复杂的前处理，大大简化了分析步骤，提高了分析效率。 

本发明利用液相色谱与电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-MS/MS)联用技术，建立了同时对烟草中20种非衍生化氨基酸的快速分析方法。结果显示，该法重现性好、灵敏度和选择性高，成功的应用于对各种烟草样品氨基酸的分析测定。 

本申请人经过大量的实验，利用液相色谱与电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-MS/MS)联用技术，建立同时对烟草中20种非衍生化氨基酸的快速分析方法，而对样品进行合适的前处理，获得适合于这种技术的提取液是联用技术获得准确和高灵敏度结果的关键。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种用于氨基酸分析的烟草提取液的制备方法，这是对待进行氨基酸分析的烟草样品的一种简单、实用的前处理方法。 

本发明的目的通过以下技术方案来予以实现： 

提供一种用于氨基酸分析的烟草提取液的制备方法，包括以下步骤： 

(1)以含正缬氨酸的HCl溶液为萃取溶液，在超声波震荡下萃取烟末； 

(2)过滤。 

步骤(1)所述萃取烟末与萃取溶液的比例为0.1～0.2g∶20ml。 

步骤(1)所述HCl溶液浓度为0.03M。 

步骤(1)所述萃取时间为15min。 

步骤(2)所述过滤采用0.2μm滤膜过滤。 

本发明所述制备方法制备得到的烟草提取液采用直接进样的方式应用于液相色谱与电喷雾离子阱串联质谱联用分析中。 

本发明的有益效果是针对现有烟草及其制品中所含氨基酸分析方法中样品前处理技术的不足，选择了合适的萃取溶液对烟草进行萃取，并通过大量实验总结得到萃取溶液的浓度、使用量、萃取时间等精确的条件，配合液相色谱和电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)联用的技术，提供了一个完整的实验方案，不再需要对烟草样品进行繁琐的柱前或柱后衍生化等复杂的前处理，实验获得良好的色谱峰形以及适宜的色谱运行时间，并且可使同分异构体Leu和Ile达到基线分离，从而获得准确的分析结果。 

附图说明

图1  20种氨基酸和内标正缬氨酸的提取离子流图 

图2  加标前Ile和Leu提取离子流图 

图3  加标后Ile和Leu提取离子流图 

图4  加标前Val和Nva提取离子流图 

图5  加标后Val和Nva提取离子流图 

图6～26  氨基酸的二级质谱图 

具体实施方式