[发明专利]从造礁石珊瑚中提取虫黄藻基因组DNA的试剂盒及其方法

权利要求书

1.从造礁石珊瑚中提取虫黄藻基因组DNA的试剂盒，包含有以下试剂：

(a)试剂A：由pH8.0，100-300mM的Tris-Boric溶液、10-100mM的EDTA溶液、质量浓度1-5％的SDS溶液、50-200mM的NaCl溶液和蒸馏水按25∶10∶10∶2∶53的体积比混合而成；

(b)试剂B：为蛋白酶E，其浓度为5-15mg/ml；

(c)试剂C：为RNAase A，其浓度为5-30mg/ml；

(d)试剂D：为过饱和NaCl溶液，含有5-7M的NaCl；

(e)试剂E：为DNA洗涤液，为体积浓度为60-80％的乙醇溶液；

(f)试剂F：为DNA洗脱液，采用pH8.0，5-20mM的TE缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于包含以下试剂：

(a)试剂A：由pH8.0，250mM的Tris-Boric溶液、50mM的EDTA溶液、质量浓度2％的SDS溶液、100mM的NaCl溶液和蒸馏水按25∶10∶10∶2∶53的体积比混合而成；

(b)试剂B：为蛋白酶E，其浓度为10mg/ml；

(c)试剂C：为RNAase A，其浓度为20mg/ml；

(d)试剂D：为过饱和NaCl溶液，含有7M的NaCl；

(e)试剂E：为DNA洗涤液，为体积浓度为75％的乙醇溶液；

(f)试剂F：为DNA洗脱液，采用pH8.0，10mM的TE缓冲液。

3.一种使用要得要求1所述的试剂盒从造礁石珊瑚中提取虫黄藻基因组DNA的方法，包括以下步骤：

(1)样品处理：取约10-30mg造礁石珊瑚，加入液氮充分研磨成粉末状，小心倒入2ml离心管；

(2)细胞裂解：加入100-300ul试剂A，10-30ul试剂B，以移液枪头搅匀，60℃水浴5-15小时，期间振摇数次，然后加入2-6ul试剂C，轻柔摇匀，37℃水浴1-5小时；

(3)杂质沉淀：加入100-300ul试剂D，轻柔摇匀，70℃水浴5-15分钟，然后加入100-300ul无水乙醇；

(4)DNA吸附：将DNA吸附柱放置在离心管中，将上清液全部吸入DNA吸附柱中，6000-10000rpm，离心1-3分钟；

(5)杂质洗除：弃离心管中的滤液，重新将DNA吸附柱放置在离心管中，加入试剂300-600ul E，6000-10000rpm，离心1-3分钟，重复1-2次，然后将DNA吸附柱放置在离心管中，空管10000-13000rpm，离心3-8分钟；

(6)DNA洗脱：将DNA吸附柱放置在新的离心管中，37℃吹干5-20分钟，在吸附柱中加入25-75ul试剂F，放置1-5分钟，10000-15000rpm，离心1-8分钟，离心管中收集液体即为虫黄藻基因组DNA溶液，-20℃保存。