[发明专利]HPV高危和低危亚型分型DNA微阵列芯片

说明书

所属技术领域

本发明涉及一种DNA微阵列芯片，特别是涉及人乳头瘤病毒(HPV)亚型基因分型DNA 微阵列芯片。采用固相载体基片，针对HPV各亚型的寡核苷酸探针，制备成DNA微阵列芯片， 可以高灵敏度、高特异性的一次性同时检测多个样本的HPV高危和低危亚型，可以广泛应用 于HPV病毒感染定性和分型检测。

技术背景

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一种最小的DNA(脱氧核糖核酸)病毒。 主要感染上皮细胞。到目前为止，已鉴定出HPV达80多个亚型，有资料报道为100种以上 HPV亚型。HPV在人类感染率很高，自然人群中HPV感染率从低于1％到高达50％，性活 跃人群中20％～80％以上的人有HPV感染史。

HPV感染最常见的部位之一是肛门外生殖器，引起肛门外生殖器尖锐湿疣，近年来，尖 锐湿疣发病率逐年升高，目前已在性病属性传播疾病中排第二的位置，发病率仅次于淋病。 是除艾滋病外对患者影响最大的传染疾病。

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，死亡率仅次于乳腺癌。我国患病人数和死亡人数均 占全世界1/3，每年新发病例约有13万。在临床病理检查中，宫颈癌患者几乎100％的有高 危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染，可以肯定地说，HPV感染是宫颈癌患发的主要原因。 宫颈癌是目前为数不多的已经明确了病因的癌肿，又是一种可预防、可治愈的疾病，关键在 于早发现，治疗宫颈癌前病变，终止其向宫颈癌的发展。在女性体检中，开展HPV基因检测 对宫颈癌的早期诊断具有重要的临床诊断和预防、治疗意义。因此2003年8月30日美国FDA 将HPV基因检测作为妇女常规检测项目。我国近年临床上已经启动此项检测，部分经济发达 省市有列入妇女常规体检和普查项目的计划。

HPV是一组病毒的总称，组成一个科，其病毒形态类似，但DNA限制性内切酶图谱各 异，核壳体蛋白质的抗原性不同。目前已经确定的HPV型别大约有80余种，依其感染的上 皮所在部位分为皮肤型HPV和生殖道上皮HPV，大约35种型别可感染妇女生殖道，约20 种与肿瘤相关。依据不同型别HPV与肿瘤发生的危险性高低分为低危险型别和高危险型别 HPV，低危险型别HPV包括HPV6，11，32，34，40，42，43，54，MM8等型别，常引起外生殖器湿疣 等良性病变包括宫颈上皮内低度病变(CINI)，高危险型HPV包括HPV16，18，26，31，33， 35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，83，MM4等型别，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变 (CIN II/III)的发生相关，尤其是HPV16和18型。

鉴于以上HPV感染和危害情况，发明一种快速、高准确度、高通量的HPV分型检测产 品具有重要意义。

由于HPV体外增殖非常困难，到目前为止尚无可靠的血清学分型方法。传统的方法是通 过形态学和免疫学方法对其进行检测，如巴氏涂片法，液基薄层细胞学检查，阴道镜检查， 组织病理学检查，电镜检查，发射免疫法和酶联免疫法测定血清抗体水平等。这些传统的HPV 检测方法灵敏度和特异性均不好，存在较高的假阳性和假阴性率，并且不能分型。

近年来，随着分子生物学的发展，科学工作者采用现代分子生物学方法，包括核算杂交 法、PCR法、荧光定量PCR法等进行HPV检测，但这些方法仍然存在灵敏度、特异性、通 量等方面的问题，不能很好的适应临床要求。

本世纪90年代，诞生了基因微阵列芯片技术，该技术具有高通量、集约化、低成本、高 准确性等特点，是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新 技术，具有重大的基础研究价值，又具有明显的产业化前景。由于用该技术可以将极其大量 的探针同时固定于支持物上，所以一次可以对大量的生物分子进行检测分析，从而解决了传 统核酸印迹杂交技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、低通量等不足。而且，通 过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值，该技术 为HPV基因分型检测提供了合适的解决办法。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种人乳头瘤病毒(HPV)全亚 型基因分型DNA微阵列芯片。这种具有高通量、高准确性的DNA微阵列芯片，可以对HPV高 危型和低危型进行全面分型检测。