[发明专利]用于检测黄曲霉毒素B1的生物传感器电极及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测黄曲霉毒素B₁的生物传感器电极，包括基底层及在基底层上形成的反应层，其特征在于：所述的反应层由电子介体、溶胶凝胶和黄曲霉毒素氧化酶组成，电子介体固定在基底层上，溶胶凝胶将黄曲霉毒素氧化酶包埋于电子介体修饰的基底层上成膜。

2.根据权利要求1所述的生物传感器电极，其特征在于：所述的电子介体由在酸氧化环境下活化的多壁碳纳米管构成；所述的溶胶凝胶的前驱体为正硅酸乙酯，在溶胶凝胶中正硅酸乙酯的质量百分比为10％～15％。

3.根据权利要求2所述的生物传感器电极，其特征在于：所述的多壁碳纳米管是以硝化氧化方式活化处理所得的羧基化多壁碳纳米管。

4.权利要求1-3之一所述生物传感器电极的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、将多壁碳纳米管进行羧基化的活化处理后，加入到含有0.05％～0.15％质量表面活性剂的纯水中混匀，即得羧基化多壁碳纳米管溶液；

(2)、制备黄曲霉毒素氧化酶；

(3)、在酸性环境下，正硅酸乙酯作为前驱体，被催化水解成为的羟基化的产物和相应的醇，即得到A溶液；

(4)、以羧基化多壁碳纳米管溶液对工作电极进行修饰成膜，黄曲霉毒素氧化酶的酶液与上述A溶液混合，用还原剂调混合液pH至7.2，混匀后，滴加于电极表面，溶胶凝胶缩聚陈化成膜后，得用于检测黄曲霉毒素B₁的生物传感器电极。

5.权利要求1-3之一所述生物传感器电极的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、羧基化多壁碳纳米管溶液的制备：将多壁碳纳米管用王水回流8～12小时，离心，弃上清，干燥后为羧基化多壁碳纳米管；将羧基化多壁碳纳米管溶于含有0.05％～0.15％质量表面活性剂的纯水中，超声波搅拌均匀后，配成0.01～1.0mg/ml的羧基化多壁碳纳米管溶液；

(2)、黄曲霉毒素氧化酶的制备：收集Armillariella tabescen真菌菌体，加入提取缓冲液，破碎，离心，取上清，用硫酸铵沉淀法获取沉淀物，以PBS混匀后上样于Phenyl Sepharose 6 Fast Flow，进一步纯化，收集色谱过程中的酶活性峰组分，浓缩后即得黄曲霉毒素氧化酶；

(3)、以正硅酸乙酯为前驱体，在酸性条件下让其催化水解，并在该水解体系中加入防裂剂，使防裂剂体积分数为2.5％～7.5％，混匀，即得到A溶液；

(4)、电极的制备：以铂电极为基底层，打磨至抛光，并依次在丙酮，强碱溶液，强酸溶液以及蒸馏水中超声波清洗，将步骤(1)所得的羧基化多壁碳纳米管溶液滴加在电极表面，烘干成膜；再将步骤(2)制备的酶液与步骤(3)制备的A溶液，以1∶11体积比混匀，并用碱性溶液调节混合液的pH值至7.2，然后滴加于电极表面，-4℃放置24小时以上，陈化；直至溶胶凝胶薄膜缩聚陈化完全，得用于检测黄曲霉毒素B₁的生物传感器电极。

6.根据权利要求5所述的生物传感器电极的制备方法，其特征在于，所述的防裂剂为Triton-100或聚乙二烯。