[发明专利]一种能串联表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素1－34肽类似物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种能串连表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素1-34肽类似物的多 联体，其特征在于：所述人甲状旁腺素1-34肽类似物的多联体是由人 甲状旁腺素1-34肽类似物C端天冬氨酸（Asp）和N端脯氨酸（Pro）重 复串联形成，其中一个类似物C端的Asp和下一个类似物N端的Pro形成 酸水解位点，在盐酸作用下可以断开，所述多联体的氨基酸序列为：

Met-X_a-Asp-( Pro-R₁-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn -Arg-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg -Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-Pro-Pro-Asp)_n

其中X_a为含有a个氨基酸残基的肽链，a为非负整数；n>1；所述X_a肽链 序列为

Gly-Asp-Glu-Ile-Ile-His-Leu-Thr-Asp-Phe-Asp-Val-Ser-Leu-Ala- Leu-Thr-Gln-Thr；人甲状旁腺素1-34肽类似物的氨基酸序列为：

Pro-R₁-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Arg-Gly-Lys-

His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu- Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-Pro-Pro-Asp

其中R₁为Pro。

2.根据权利要求1所述一种能串连表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素 1-34肽类似物的多联体，其特征在于：n=8。

3.根据权利要求1所述一种能串连表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素 1-34肽类似物的多联体的制备方法，包括重组质粒以及相应的基因工 程菌的构建步骤，人甲状旁腺素1-34肽类似物的多联体的制备步 骤，其特征在于：在重组质粒以及相应的基因工程菌的构建步骤中， 质粒pET28a为表达载体质粒，质粒pED-Pro-Pro-［Arg¹¹］］hPTH(1-3 4)-Pro-Pro为模板，是通过PCR反应获得含有人甲状旁腺素1-34肽类似 物基因的DNA片段的扩增序列，引物的核苷酸序列为：

P1: 5′ATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGT3′

P2: 5′CCGCAAGCTTAATCTGGCGGGAAGTTATGAACA3′

P3: 5′AAAAGATCTGGCGGGAAGTTATGAACATC3′

P4:

5′AGATATACATGGGCGATGAAATCATCCACCTGACTGACTTCGATGTTTCTCTG

GCTCTG3′

P5:

5′CCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATGGGCGATG

AAA3′。

4.根据权利要求3所述一种能串连表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素 1-34肽类似物的多联体的制备方法，其特征在于：在人甲状旁腺素1- 34肽类似物的多联体制备步骤中，将重组基因工程菌BL21/pED-8PTH′ 经发酵-离心-洗涤沉淀-乙醇沉淀得到多联体粗品，其中发酵温度是3 6-38℃，pH6.8-7.2。