[发明专利]截短侧耳素的发酵方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种截短侧耳素的发酵方法。

背景技术：

目前生产沃尼妙林中间体——截短侧耳素发酵生产工艺中，各厂都是采取补料分批发酵法，即液氮冷冻管菌种接种至试管斜面，经15天培养，将生长好的斜面菌种接入摇瓶，经8-9天摇床震荡培养，再接入种子罐，通常采用二级种子罐培养，需要四天时间，接入发酵罐以后，根据菌体生长代谢的需要，不断补入葡萄糖、豆油、碱、水等物料，发酵300小时左右，效价在9000-10000u/ml放罐，发酵液供截短侧耳素提取。分批发酵法发酵罐利用率低，发酵罐利用率只有75％左右，菌种的生产能力没有得到充分发挥。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种可以有效提高发酵罐利用率、菌种的生产能力的截短侧耳素的发酵方法。

本发明的技术解决方案是：

一种截短侧耳素的发酵方法，其特征是：包括将菌种接种至试管斜面，经15天培养后，将生长好的斜面菌种接入摇瓶，经8～9天摇床震荡培养后再接入种子罐，接入种子罐的接种量为发酵罐液体容量的15％，经三级培养后自发酵，发酵30～50小时至还原糖降至1.0％时，连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.8～1.0％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至120～150小时时，观察菌丝生长状况，当菌丝美兰染色由深变淡时，补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，发酵时间为210～230小时，发酵至效价为9000～10000u/ml，发酵液体积达发酵罐液体容量的70％～80％时，放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，再补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，及发酵罐液体容量8.8％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.5～0.8％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵时间为240～260小时，至效价在9500～10500时，再次放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，并补入相当于发酵罐液体容量10％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.4～0.6％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至270～290小时时，放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，再补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，及发酵罐液体容量8.8％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.4～0.6％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至300-320小时，效价达10000-11000u/ml，发酵体积为发酵罐液体容量的75-80％，发酵指数为0.036十亿/m³.h。

本发明可以有效提高发酵罐利用率、菌种的生产能力。截短侧耳素发酵菌种属担子菌纲侧耳菌属(pleurotus mutilus)，截短侧耳素是脂溶性化合物，存在于菌丝体内。采用补料并定时放料分批发酵法菌体的平均生产速率比一般的补料分批发酵提高10.0％，从而使罐批产量增加，主要是由于中间带放料使菌体代谢尽可能处于原有的平衡状态，使菌体比生产速率增加，相应地增加了比生产速率及生产速率。因在整个发酵过程中空气不断通过发酵液带走发酵液中的水分，水分在不断蒸发，取无菌样和测生化样减少少量体积，因此在每次带放料后除补充同体积的新鲜培养基或水以外，发酵过程中蒸发的水分和取样减少的体积主要由流加的糖液、调PH的碱液及菌体对基质氧化及产物合成产生的水来补充的，因调PH的碱液用量及菌体对基质氧化及产物合成产生的水很少，所以发酵液减少的体积主要由流加的糖液中的水来补充的。蒸发量与通气量成正比，与空气密度成正比，与空气湿度成反比，所以蒸发量受季节影响较大，冬季由于空气湿度的较低，流加糖的浓度通常在30％左右，夏季为40％，同时也要根据发酵液的体积、泡沫状况及菌体浓度，实时补入无菌水，使发酵液体积维持在75-80％。本发明效价可达10000-11000u/ml，发酵体积75-80％，罐利用率可达95-105％，发酵指数由0.025十亿/m³.h提高到0.036十亿/m³.h。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

具体实施方式：

一种截短侧耳素的发酵方法，包括将菌种接种至试管斜面，经15天培养后，将生长好的斜面菌种接入摇瓶，经8～9天摇床震荡培养后再接入种子罐，接入种子罐的接种量为发酵罐液体容量的15％，经三级培养后自发酵，发酵30～50小时至还原糖降至1.0％时，连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.8～1.0％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至120～150小时时，观察菌丝生长状况，当菌丝美兰染色由深变淡时，补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，发酵时间为210～230小时，发酵至效价为9000～10000u/ml，发酵液体积达发酵罐液体容量的70％～80％时，放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，再补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，及发酵罐液体容量8.8％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.5～0.8％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵时间为240～260小时，至效价在9500～10500时，再次放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，并补入相当于发酵罐液体容量10％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.4～0.6％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至270～290小时时，放出相当于发酵罐液体容量10％的发酵液，再补入发酵罐液体容量1.0％的玉米浆及发酵罐液体容量0.2％的豆饼粉，及发酵罐液体容量8.8％的无菌水，并连续流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使发酵液中葡萄糖含量为0.4～0.6％，，并用NaOH溶液调节发酵液PH值至6.8～7.0；发酵至300-320小时，效价达10000-11000u/ml，发酵体积为发酵罐液体容量的75-80％，发酵指数为0.036十亿/m³.h。