[发明专利]一种猪血卟啉铁及其制备方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种营养保健品及其制备方法，特别涉及一种补铁剂及其制备方法，具体地说是在一种猪血卟啉铁及其制备方法。

二、背景技术

目前常用的补铁剂为非卟啉铁，如硫酸亚铁，为无机元素铁，人体吸收率低，并有一定的副作用。市场上用猪血做原料生产的产品含铁量仅1.4％，以有机铁血红素形式存在的铁更是微乎其微，绝大部分铁还是以元素铁的形式存在，人体吸收利用率比较低。从红血球中提取的卟啉铁，无毒无害，一般不受膳食因素影响，可望取代目前常用的补铁剂，但是，作为一种补铁药物，实际提取出来的卟啉铁难溶于水，严重影响了其吸收和利用。国内外一些学者、专家企图通过不同的卟啉铁提取方法提高卟啉铁的溶解度，但是，存在工艺流程、成本、产品纯度、得率和溶解度等问题，尤其是卟啉铁的溶解度问题一直没有获得突破性进展。

三、发明内容

本发明旨在提供一种猪血卟啉铁补铁剂及相应的制备方法，所要解决的技术问题是提高猪血卟啉铁的溶解度。

本发明所称的猪血卟啉铁是自新鲜猪血中分离、提取并修饰得到的卟啉铁，本卟啉铁有以下化学结构式：

本猪卟啉铁的制备方法，以新鲜猪血为原料，首先分离除去血清提取血红蛋白，然后超声破壁，与现有技术的区别是对血红蛋白破壁后进行酶解以及酶解后的酸性丙酮法分离提取卟啉铁。

所述的酶解是向破壁后的血红蛋白中加入蛋白酶于28～38℃条件下酶解7～10小时得到酶解液，蛋白酶的加入量以底物红血球计为7500～8500U/g；所述的蛋白酶选自胰蛋白酶或胃蛋白酶或碱性蛋白酶或中性蛋白酶。

优选30～36℃条件下酶解8小时，酶加入量以底物红血球计为8000U/g。

所述的酸性丙酮分离提取法是向酶解液中加入4～6倍体积的丙酮，并调pH至2.5～3.5，搅拌均匀，离心分离，收集上清液血红素丙酮溶液；向血红素丙酮溶液中加入浓度为1.0％～5.0％(w/w)的醋酸钠溶液，使混合液pH至6.5～7.5，搅拌均匀后静置、结晶沉淀，待结晶完全后分离，结晶即是猪血卟啉铁。最后用蒸馏水洗涤、干燥。

红血球是一种血红蛋白，所以选择蛋白酶进行酶解修饰。所谓修饰就是使血红蛋白的氨基酸序列中疏水性氨基酸所占的比例小于亲水性氨基酸以提高其溶解度。表1、图1给出了四种蛋白酶单因素酶解时间对卟啉铁吸光度影响的试验结果。

表1单因素酶解时间对卟啉铁吸光度影响

表1结果显示，4种单因素酶解在卟啉铁吸光度最高值均超过了原药(氯化血红素)的1.041，也就是说，经过酶解后卟啉铁溶解度有了一定的提高。图1显示：在酶解8小时前吸光度逐渐上升，8小时左右吸光度达到峰值，之后逐渐下降。酶解24小时左右，4个吸光度都小于1.041，但比较接近。而在这其中，尤以碱性蛋白酶提高最为显著，8小时左右其吸光度达到了1.711。所以优选碱性蛋白酶进行酶解修饰。

本方法每1L新鲜猪血可得到3.12g卟啉铁，本卟啉铁溶解度较标准品提高了65.5％，铁含量为9.1％。可望取代目前常用的补铁剂。

四、附图说明

图1：四种蛋白酶单因素酶解时间对卟啉铁吸光度影响曲线。

图2：本猪血卟啉铁的红外光谱图。图中在1000cm^-1左右处的峰值增强，说明卟啉环上的N原子与金属铁进行了配位。

图3是标准品卟啉铁的溶解度曲线。

五、具体实施方式

1、自新鲜猪血中提取分离红血球

采集新鲜猪血，加入浓度为0.38％(w/w)的柠檬酸三钠作为抗凝剂，加入量为猪血量的4％(v/v)，4000r/min转速离心分离15min，收集红血球，经超声破壁后加入氯仿，加入量为红细胞量的0.15倍(v/v)，4000r/min转速离心分离15min，收集上层血红蛋白溶液，4℃冷藏备用。

2、酶解

取冷藏备用的血红蛋白溶液，加入碱性蛋白酶于35℃条件下酶解9小时得到酶解液，酶加入量以血红蛋白计为8000U/g。

3、后处理

向酶解液中加入丙酮，并用醋酸调pH至3.0，丙酮加入量为红细胞量的4～6倍(v/v)，搅拌均匀后4000r/min转速离心分离10min，收集上清液即血红素丙酮溶液；向血红素丙酮溶液中加入浓度为3％(w/w)的醋酸钠溶液，使混合液pH至7.0，搅拌均匀后静置、结晶，待结晶沉淀完全后离心分离，收集沉淀即是猪血卟啉铁粗品，用去离子水和无水乙醇依次洗涤沉淀，真空干燥，得到经酶修饰的猪血卟啉铁。