[发明专利]一种微胶囊化葡萄糖氧化酶的制备方法

权利要求书

1. 一种微胶囊化葡萄糖氧化酶的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：

1)将海藻酸钠在室温下机械搅拌使其溶解在水中，形成均一透明的质量浓度为1％-5％的溶胶；将分子量5,000-450,000、脱乙酰度为70％-98％的壳聚糖加入质量浓度0.1％-2％的冰醋酸水溶液中，生成pH3.0-5.0、浓度为0.5-2％的透明壳聚糖溶液；

2)配制含1.0％-3.0％span 80的植物油溶液，高速搅拌并真空脱气，制得油相混合液I，在油相混合液I中加入冰醋酸使冰醋酸的质量浓度达到0.5％-1.5％，充分混合得油相混合液II；

3)向步骤1)得到的海藻酸钠溶胶中加入CaCO₃，加入量为0.1-1.0g/100mL，高速搅拌混和，超声波均质5-10min，真空脱气得到水相混合液；

4)配制pH3.0-5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液，并用该缓冲液配制质量浓度0.5％-2％的葡萄糖氧化酶GOD溶液；

5)将步骤3)得到的水相混合液在800-1,500rpm高速搅拌下缓缓加入到步骤2)所得到的油相混合液I中，水相混合液与油相混合液I的重量比例为1/2-1/4，搅拌乳化1-2min后加入油相混合液II，使得最终的水相混合液与总的油相混合液重量比例在1/3-1/6，继续搅拌10-20min，加蒸馏水在200-400rpm低速搅拌下破乳20min；

6)将步骤5)得到的破乳后的油水混合液冷冻离心，2,000-5,000rpm、10-30min，弃除上层油液，下层物质用质量浓度1％-3％的Tween 80洗涤离心进一步去除油液，再蒸馏水洗涤去除洗涤液，得到海藻酸钙小球CaAlg，干物质含量6-10mg/mL；

7)将步骤4)制得的GOD溶液与步骤6)得到的海藻酸钙小球CaAlg等体积混合，4℃下吸附0.5-3h，得到吸附葡萄糖氧化酶的海藻酸钙小球CaAlg-GOD；

8)将步骤7)制得的CaAlg-GOD缓慢加入到步骤1)制得的壳聚糖溶液中，800-1,300rpm快速搅拌10-20min，离心得到壳聚糖-海藻酸钙-葡萄糖氧化酶微胶囊CH-CaAlg-GOD；

9)分别配制质量浓度为10％、DE值15-20的低聚麦芽糊精和质量浓度为2％的β-环糊精，60℃下1∶1混合得到助干溶液；

10).将步骤8)制得的CH-CaAlg-GOD加入到步骤9)制得的助干溶液中，CH-CaAlg-GOD与助干溶液的体积比为1∶8-1∶12，混合均匀后喷雾干燥，离心喷洒盘的转数为10,000-40,000rpm、加料速度为10-30mL/min、进口温度170-220℃、出口温度40-70℃，制得粒径分布在10-100nm的壳聚糖-海藻酸钙-葡萄糖氧化酶微胶囊。

2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于壳聚糖选自：四种壳聚糖分子量分别为450,000、200,000、100,000、5,000，相对应的脱乙酰度分别为91％、87％、91％、85％，将四种壳聚糖分别加入含1％的冰醋酸水溶液中，制成浓度为0.5％-2％的透明的壳聚糖溶液。