[发明专利]一种石榴酒酵母的选育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酒类酵母的选育方法，具体地说是一种石榴酒酵母的选育方法。

背景技术

石榴含有大量的氨基酸、维生素和多种微量元素。石榴酒系采用石榴为主要原料，经去皮、压榨、发酵、分离、陈酿而成的果酒。石榴酒色泽光亮透明，有石榴的天然风味，含有大量的氨基酸、多种维生素等。具有很高的营养价值，并有生津化食、健脾益胃、降压降脂、软化血管、保健美容及止泻之功效。酿造石榴酒必须有酵母，现在的石榴酒酵母是用市场上购置的果酒酵母或存在于果皮中的自然酵母，但是现有酵母存在着发酵不彻底，石榴酒残糖高、酒度低、挥发酸高、果香淡薄、不宜储存等缺点。因此发明一种能够使石榴汁发酵彻底，石榴酒残糖低、酒度高、挥发酸低、果香浓郁、适宜长期储存的新的石榴酒酵母是十分必要的。

发明内容

本发明目的在于提供一种石榴汁发酵彻底，石榴酒残糖低、酒度高、挥发酸低、果香浓郁、适宜长期储存的石榴酒酵母的选育方法。

本发明内容如下：

一种石榴酒酵母的选育方法，包括下列步骤：

(1)取石榴园的土壤、石榴树叶、石榴树皮、腐烂石榴、完整石榴的表皮各10重量份，放入装有80份水的瓶中，离心机旋转30分钟，120转/分；取0.2毫升接种到用98％的无菌石榴汁和2％的琼脂制作的营养基中；

(2)取果酒干酵母1g，用35-40℃水100毫升活化后，取0.1毫升接种于培养基中，28℃培养一天；

(3)将上述(1)、(2)两种菌种接在培养基上，30℃培养一天；将培养后的酵母菌斑接种到用石榴汁97％，蛋白胨2％，酵母膏1％杀菌制成的溶液中，35℃，250转/分摇床震荡培养10-12小时；

(4)取(3)菌液5毫升，3500转/分离心5分钟，用磷酸缓冲液洗2次，加3毫升预处理剂，29℃培养10分钟后，离心5分钟，3500转/分，弃去上清液；

(5)取(3)所得菌液5毫升用蜗牛酶处理30-40分钟；

(6)取(4)、(5)所得菌液各0.5毫升混合，用0.4mol/L CaCl₂洗涤、离心，涂于培养基上，28℃培养3天；用电击仪电击，电击时间40分钟；

(7)取5毫升电击后菌液置于直径9cm的平皿中，用20W紫外光管放于30cm处照射1-2分钟，并不断搅拌，稀释涂布诱变培养基中；

(8)取澄清的石榴汁，调整糖度12-14％，PH：5-6，加琼脂2-2.5％，加热至90-95℃溶化，分装于试管中，塞上棉塞，115℃高温杀菌30-40分钟；冷凝后制成酵母培养基；取(7)菌种接种到酵母培养基上，在28-30℃恒温箱中培养3天，取出放在-10℃以下保存；数日后反复培养、提纯，置于-70℃以下贮存。

培养基为澄清石榴汁90％、蛋白胨2％、葡萄糖5％、酵母膏1％、琼脂2％制成；磷酸缓冲液为：92份0.2mol/L NaH₂PO₄和8份0.2moL/L NaHPO₄、PH＝5.8制成；预处理剂为：100毫升磷酸缓冲液中加0.1毫升EDTA和0.1毫升β-巯基乙醇制成；诱变培养基为：培养基加0.2％的LiCl制成。

本发明的要点在于：根据自然界中野生酵母菌的存在，取石榴园的土壤、石榴树叶、石榴树皮、腐烂石榴、完整石榴的表皮加水离心分离培养；取果酒干酵母，用水活化培养；再将上述两种菌种接种在培养基上培养；经缓冲液冲洗、蜗牛酶处理、电击、紫外光照射诱变，最后经酵母培养基培养制成。

本发明的第一步是根据自然界中野生酵母菌的存在，选择样品来源。样品主要来源于石榴园的土壤，玛瑙石榴叶表皮，石榴树腐朽树皮及腐烂石榴和完整石榴的表皮。本发明采用先富集然后分离纯化的顺序，取每种样品各10份，分别放入装有80份的无菌水瓶中。离心机120转/分，旋转分离30分钟后，取0.2毫升涂布在平皿上。平皿基用98％的无菌石榴汁和2％的琼脂制作，每个样品3个平行。从上述平皿中挑选典型菌落，再通过平皿进行分离纯化，选育出直径大、活力强、纯度高的酵母菌，接种斜面培养基中。

培养基的制备方法是：澄清石榴汁、90％、蛋白胨2％、葡萄糖5％、酵母膏1％、琼脂2％，经115℃灭菌30分钟制成。

第二步取现有商品酵母果酒活性干酵母1g，用35-40℃水100毫升进行活化后，取0.1毫升接种于斜面培养基中，28℃温度培养一天。