[发明专利]动植物或微生物代谢物或海水中活性成分的降幂筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动植物或微生物代谢物或海水中活性成分的降幂筛选方法。

背景技术

目前分离筛选动植物或微生物代谢物或海水中活性成分常用的方法很多。按现有的分离筛选方法，例如将涉及10^M种成分的样品进行分离筛选，必须先将该样品中10^M个组分分离，然后对10^M个组分分别用筛选模型(如生物培养筛选模型、体外抗肿瘤培养筛选模型、生物抗菌培养筛选模型等等)实验进行筛选，尽管筛选出的是一种活性最强的成分，但其他10^M-1种组分的分离筛选实验必须全部进行，程序复杂，工作繁重，费时费力。

发明内容

本发明的目的是提供一种动植物或微生物代谢物或海水中活性成分的降幂筛选方法，它能克服现有技术上的上述缺点。

一种动植物或微生物代谢物或海水中活性成分的降幂筛选方法，其特征是将含有待降幂筛选活性成分的样品，用公知的纸色谱或薄层色谱或电泳展开；将纸色谱的纸或薄层色谱上的涂布层或凝胶电泳上的凝胶分成N份，再将N份中的每份分成二部分，成为2N份，将其中N份分别用公知的筛选模型实验进行筛选；将另N份保存备用；用筛选模型实验筛选出促进生长或抑制生长的活性最高的第X份或活性较高的第Y份，用气相色谱-质谱联用仪对第X份或第Y份进行成分检测；如果检测出的成分不单一，可将备用的第X份或第Y份再进行同样的筛选，直至用气相色谱-质谱联用仪、核磁共振仪及红外光谱仪鉴定出所需要的活性成分结构为止。

本发明的优点在于：样品中含有N^M种成分，每次分为N份，按本发明的方法进行M次降幂筛选，组分由N^M降为N⁰即一个，只须做NM个模型筛选实验，不必做N^M个模型筛选实验就可将最强的活性成分筛选鉴定出来，用的装置简单，省时省力，快捷准确，能提高工作效率；应用领域广泛；市场前景及产业化后经济、社会效益可观。

具体实施方式

实施例1

植物党参中促进黑曲霉真菌生长的活性成分的降幂筛选

应用公知的纸色谱结合公知的生物培养筛选模型实验对植物党参中促进黑曲霉真菌生长的活性成分进行降幂筛选，实施步骤如下：

先制备含党参30％(重量百分浓度，下同)的党参水浸取液。将新文纸剪成20cm(宽)×30cm(高)的长方形，将其立于玻璃槽上，制成公知的纸色谱装置，用市售的微量注射器吸取上述党参水浸取液，滴加到上述的色谱纸下沿，滴加面积为20cm(宽)×1cm(高)，以蒸馏水作为展开剂进行展开后，将上述纸色谱装置平放，凉干。将凉干后的色谱纸纵向等距离分成10份，再将各份分为二部份，每部分都为10份，同一部分中每份的面积都相同，分别标记为1_1/4，1_3/4’；2_1/4，2_3/4’；3_1/4，3_3/4’；4_1/4，4_3/4’；5_1/4，5_3/4’；6_1/4，6_3/4’；7_1/4，7_3/4’；8_1/4，8_3/4’；9_1/4，9_3/4’；10_1/4，10_3/4’，第一部分中一份的面积为另一部份中一份面积的1/3，将其中的一组10份(1_1/4，2_1/4，3_1/4，4_1/4，5_1/4，6_1/4，7_1/4，8_1/4，9_1/4，10_1/4)分别放于含有10％葡萄糖的黑曲霉培养液中，灭菌后接入黑曲霉菌种，使其在黑曲霉培养液中的浓度为1％，于35℃有氧培养24h，对照组采用同样大小的本底纸。其余的10份(1_3/4’，2_3/4’，3_3/4’，4_3/4’，5_3/4’，6’_3/4，7_3/4’，8_3/4’，9_3/4’，10_3/4’)置无菌箱中保存备用。用紫外吸收光谱法测定培养液中还原糖的浓度，还原糖的浓度用公知的3，5一二硝基水杨酸比色法检测，检测结果第7_1/4份色谱纸的实验组与对照组比较OD_540nm值最低，第7_1/4份活性最高。用气相色谱-质谱联用仪测定第7_1/4份色谱纸上的成分不单一。重复上述分离筛选实验，用备用的第7_3/4’份色谱纸，制备出水浸取液，用上述同样的纸色谱装置展开，将色谱纸再等分成10份，，每部分都为10份，再将各份分为二部份，同一部分中每份的面积都相同，分别标记为1_1/4，1_3/4’；2_1/4，2_3/4’；3_1/4，3_3/4’；4_1/4，4_3/4’；5_1/4，5_3/4’；6_1/4，6_3/4’；7_1/4，7_3/4’；8_1/4，8_3/4’；9_1/4，9_3/4’；10_1/4，10_3/4’，第一部分中一份的面积为另一部份中一份面积的1/3，将其中的一组10份(1_1/4，2_1/4，3_1/4，4_1/4，5_1/4，6_1/4，7_1/4，8_1/4，9_1/4，10_1/4)分别放于黑曲霉培养液中，灭菌后接入黑曲霉菌种，使其在黑曲霉培养液中的浓度为1％，于35℃有氧培养24h，对照组采用同样大小的本底纸。其余的10份(1_3/4’，2_3/4’，3_3/4’，4_3/4’，5_3/4’，6’_3/4，7_3/4’，8_3/4’，9_3/4’，10_3/4’)置于无菌操作箱中保存备用，筛选结果：对黑曲霉增殖最大的是其中的第4_1/4份。用气相色谱-质谱联用初步测定第4_1/4份的成分不单一。再用无菌箱保存的对应的第4_3/4’份色谱纸制备出水浸取液，用上述同样的纸色谱装置展开，重复上述筛选实验，筛选结果：以第5_1/4份对黑曲霉增殖最大。将备用的第5_3/4’份再进行同上述步骤的降幂筛选后，取对黑曲霉增殖最大的一份，用丙酮提取活性成分，用气相色谱-质谱联用仪、核磁共振仪及红外光谱仪鉴定出对黑曲霉增殖最大的活性成分结构。