[发明专利]一种发酵生产克拉维酸的方法

权利要求书

1.一种利用棒状链霉菌发酵生产克拉维酸的方法，包括斜面菌种的制备、摇瓶种子液的制备、种子液的制备以及发酵培养，其工艺步骤如下：

(1)斜面菌种的制备：将冻干的棒状链霉菌菌种用无菌水稀释后涂布装有固体培养基的斜面上，温度28℃，湿度40-60％，培养10-12天，产孢后加无菌水制成孢子悬浮液；

(2)摇瓶种子液制备：将斜面孢子接种摇瓶种子培养基，250rpm，温度28℃，湿度40-60％，培养20-40小时；

(3)种子液的制备：将(2)中培养好的摇瓶种子接种种子罐中，接种量为0.5-2％，在28℃下，搅拌转速300-500转/分，通气量0.5VVM-1.0VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.05-0.07MPa的条件下，培养20-40小时；

(4)发酵培养：将(3)中培养好的菌种接到发酵罐中，接种量为5-15％(体积百分比)，在温度为28℃，搅拌转速为300-600转/分，通气量0.5VVM-1.2VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.05-0.08MPa，pH为6.5-7.5，补入营养物质的条件下，培养90-120小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的(1)步骤中所用培养基成分和含量为葡萄糖4-10g/L，麦芽提取物4-10g/L，酵母膏4-10g/L，琼脂20-25g/L，pH为6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的(2)步骤中所用培养基成分和含量为蛋白胨3-10g/L，麦芽提取物3-10g/L，酵母膏3-10g/L，pH为6.5-7.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的(3)步骤中所用液体培养基成分和含量为甘油10-20g/L，棉籽粉20-30g/L，麦芽提取物5-15g/L，消泡剂2-4g/L，pH为6.5-7.5。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的(4)步骤中所用液体培养基成分和百分比含量为甘油 10-20g/L，棉籽粉 40-60g/L，淀粉 10-20g/L，KH₂PO₄ 1.0-3.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5％-2.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.005-0.035g/L，MnCl₂·4H₂O 0.005-0.015g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.005-0.045g/L，消泡剂 2-5g/L，pH为6.5-7.5。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的(4)步骤中补入的营养物为麦芽提取物和甘油溶液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在发酵过程中，在菌丝生长阶段，补入麦芽提取物溶液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于在发酵过程中，在菌丝生长阶段，补入麦芽提取物溶液的浓度为20-40％，补料速度为15-20ml/h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在发酵过程中，在产生克拉维酸阶段，补入麦芽提取物和甘油混合溶液。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于在发酵过程中，在产生克拉维酸阶段，补入麦芽提取物、甘油、水的比例为0.5∶2-4∶10。