[发明专利]禽转移因子纳米脂质体及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种禽转移因子新剂型，特别是涉及禽转移因子经纳米脂质体包被制成转移因子纳米脂质体及其制备方法。

(二)背景技术

近年来，我国养禽业快速发展，集约化饲养程度日益提高。家禽的集约化饲养，带来的好处是显而易见的，但是过分拥挤的饲养环境，配合饲料的使用，使家禽的生活习性、生产性能和免疫状况都发生了巨大的改变。老病重新流行，症状呈现非典型性；新病毒亚型疾病出现，肿瘤性免疫抑制病出现前所未有的高涨，这些问题困扰着禽病专家和养禽业者。目前，无疫苗的肿瘤性免疫抑制病通常采取净化鸡场进行防制，逐渐淘汰感染的病鸡，但这一程序既耗费人力、物力又收不到理想的效果；而有疫苗保护的疾病采用单纯疫苗免疫又常常出现免疫失败现象；家禽饲料中添加抗生素类药物、疾病防治中过量使用药物屡见不鲜，导致动物产品中出现药物残留，严重制约了肉食类产品的出口，损害着人民的生命健康。目前，食品安全问题已成为当今世界公共卫生的关注焦点。因此，临床上急需具有治疗作用的免疫调节剂，在早期从加强机体的免疫能力入手，对抗病毒尤其是缺乏疫苗保护的肿瘤性病毒，减少药物使用量，加强疫苗的保护率，实现动物产品的安全化。

转移因子(TF)具有传递免疫信息，激发免疫细胞活性，调节免疫功能，增强机体非特异性细胞免疫功能等作用，且由于其分子量小，无毒性，不存在种属屏障，无抗原性，不引起过敏反应等优点，是临床应用中极为理想的生物免疫增强剂和调节剂。目前国内外的很多资料显示，人类临床上TF作为直接或辅助药物，用于一些顽疾的治疗和缩短一些慢性病的治愈时间；兽医对于TF研究应用的广度和深度还不够，尤其是关于转移因子纳米脂质体的研究更未见报道。但由于TF是小肽类物质，在体内分布较快，作用时间短，生物利用度低且TF可被水解酶降解，口服不能很好的发挥其作用，这些缺点制约着TF的进一步推广应用。因此，急需一种新的剂型以提高TF的生物利用度和作用时间，而纳米脂质体作为非病毒类载体完全符合这一要求。纳米脂质载体是类脂双分子薄膜在一定条件下形成的类似细胞膜结构的超微球体，制备所用的主要材料--磷脂质及辅料都是生物可降解的物质。脂质体药物可以改变体内药物动力学特性，与细胞亲和力强，缓释长效，安全无毒，具有免疫佐剂和促进吸收效果的作用，已成为当今药剂学研究的热点。纳米载药系统与传统载药方式相比，显著的优点在于提高药物运输的靶向性；改变药物的透膜能力；控制药物释放；提高药物的稳定性；使给药途径和给药方式多样化；降低药物的毒副作用。

(三)发明内容

本发明的目的是为了扩大转移因子的应用范围，为解决动物产品药物残留问题，提高疫苗保护率提供一种抗病毒作用的免疫调节剂及制备方法。

本发明是这样实现的：健康禽脾脏经匀浆、透析提取制备非特异性TF，冷冻干燥制成转移因子冻干粉；逆相蒸发法制备纳米脂质体；将所得的转移因子冻干粉经纳米脂质体包被，最后制成转移因子纳米脂质体乳白色混悬液。

本发明的具体实现是：取健康的禽脾脏碎片按1∶1加入灭菌生理盐水(即1g脾脏加1ml生理盐水)后，以4000～5000rpm离心3min，每次间隔2min，共离心3次，将反复冻融的匀浆液上清液装入截留分子量为10000的透析袋中，磁力搅拌14～20h，真空冷冻干燥，制成转移因子冻干粉。采用逆相蒸发法，将卵磷脂、胆固醇溶于氯仿中，卵磷脂与胆固醇的比例为1∶1～3∶1，37℃水浴减压旋转除去氯仿，得到纳米脂质体薄膜，加入1～3ml含TF 4～6mg/ml的pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)溶液和吐温-80，水浴超声处理，旋转除尽氯仿，得到转移因子纳米脂质体(TFNL)混悬液。

上述技术方案中所述的禽转移因子可来源于鸡、鸭、鹅等一切健康禽类的脾脏。

所述转移因子的冷冻温度均为-20℃。保存温度为4℃。

与现有技术相比，本发明的优点是：

1、通过转移因子剂型的改变，显著增强了TF的生物利用度和药效。解决了TF口服吸收效果差、用量大的难题。

2、纳米脂质体转移因子高效安全易于保存，通过饮水可与疫苗配合使用，能显著增强机体免疫效果，适合于当前集约化饲养方式，具有广泛、良好的应用前景。

3、所述上述技术方案中有益效果是，脂质体包被TF后可以使TF避免胃酸酶的降解，并且在肠道内吸收良好，TFNL无毒、无副作用，性质稳定，保质期为4.5个月，TFNL作为疫苗佐剂具有显著的增强抗病毒效果。TF浓度为6mg/ml，吐温-80为1ml，有机相/水相(体积比)为4∶1。卵磷脂/胆固醇(摩尔比)为2∶1。

(四)附图说明