[发明专利]一种检测还原糖浓度的电化学方法

说明书

所属领域

本发明涉及一种测定还原性单糖浓度的分析方法。

背景技术

还原糖是发酵、食品领域最基本的工业原料，还原糖快速、准确的测定对生产过程控制和食品质量检验具有重要的意义。还原糖的测定方法很多，目前工业生产中普遍采用的是费林试剂滴定法^[2]。该方法要求在测定液沸腾状态下滴定，操作不便，干扰因素多，人为误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来不便。仪器分析方法有液相色谱法、放射测定、气质联用、紫外及红外光谱分析、核磁共振等，由于操作条件要求高，样品需经衍生或其它处理后才能测定，测定时间长，测定和维护成本较高等原因，不适于大批量样品的糖类化合物含量检测，在我国实际生产和科研领域一般不被采用。分光光度法可用于检测蜂蜜中的还原糖，但对于浑浊和有不同颜色的样品实用性则较差。国家知识产权局1997年2月12日公开了一项发明专利申请“电化学测量方法和仪器”(公开号CN 1142867A)该申请采用薄层电化学测量装置，优选毛细填充装置，进行电化学测定溶液中的还原糖含量，该发明专利方法所测定的还原糖含量在25mmol约合0.45％以下并需要制作专用的分析装置，难以推广应用；2004年5月11日公开的一项发明专利申请“一种测定还原糖浓度的方法”，该申请方法是将样品溶液与过量氯化四氮唑蓝在pH为7.5-8.5条件下反应，反应液经脱水、振荡下加入乙酸乙酯至沉淀物溶解，取上清液测定吸光度得出还原糖含量，该法测定还原糖最高为2.5μg/mL，此方法分析步骤繁多、费时长，尤其不适用于大量样品分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速、准确、操作简便的测定还原糖浓度的方法。

本发明所提供的测定还原糖浓度的方法，包括如下步骤：1)将样品溶液与过量铁氰化钾(K₃Fe(CN)₆)和氢氧化钠(NaOH)混匀80℃保温1.0min，2)反应液冷却至室温后用Ag/AgCl参比电极、玻碳工作电极和Pt片辅助电极构成三电极系统，测定还原糖与K₃Fe(CN)₆反应生成的还原产物亚铁氰化钾(K₄Fe(CN)₆)的氧化电流，据此测得还原糖含量。

技术方案

1实验原理：还原糖在碱性溶液中能将铁氰化钾(K₃Fe(CN)₆)还原为亚铁氰化钾(K₄Fe(CN)₆)，以葡萄糖为例，其反应式为：

C₆H₁₂O₆+6K₃Fe(CN)₆+6KOH＝(CHOH)₄·(COOH)₂+6K₄Fe(CN)₆+4H₂O

在反应中K₃Fe(CN)₆过量，还原糖含量与生成的K₄Fe(CN)₆的浓度呈等摩尔关系，而K₄Fe(CN)₆是一种电化学氧化还原活性物质，当工作电极上加一定正电位，K₄Fe(CN)₆能够被氧化生成K₃Fe(CN)₆。由于K₄Fe(CN)₆的氧化电流与还原糖浓度呈一定摩尔关系，因此可以根据测得的K₄Fe(CN)₆的氧化电流信号计算还原糖的含量。