[发明专利]水产品中无机砷的测定方法

权利要求书

1、一种水产品中无机砷的测定方法，其特征在于它的方法为高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱HPLC-HGAFS联用形态分析方法，包括：(1)、选用的仪器及设备，(2)、配置试剂与标准溶液，(3)、进行测试步骤，(4)、实验所用的仪器条件，(5)、结果计算；

(1)、仪器及设备：HPLC-HGAFS联用系统；

1)、HPLC部分，使用LC-10ATVP高压液相泵；配有100μL定量环的7725i六通进样阀；配有相同材质填料保护柱25mm×2.3mm i.d，12-20μm的PRP-X100250mm×4.1mm i.d，10μm阴离子交换柱：

2)、HGAFS-9130原子荧光光谱仪；配有激发光源：高性能砷空心阴极灯；形态分析测量软件：

3)、SHA-C水浴恒温振荡器；

4)、SH/T0093砂芯过滤器；

5)、SHZ-D循环式真空泵；

6)、DELTA320酸度计；

7)、KQ-600DE数控超声清洗器；

8)、0.45μm水系微孔滤膜；

9)、氩气：纯度≥99.99％：

(2)、配置试剂与标准溶液；

1)、试剂；

a、①、50％的盐酸溶液，量取250mL浓盐酸，慢慢加入250mL水中，混匀；②、7％的盐酸溶液：量取280mL盐酸，慢慢加入3720mL水中，混匀：

b、5g/L的氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾5g溶于水中，并稀释至1000mL：

c、15g/L的硼氢化钾溶液；取硼氢化钾15g溶于1000mL的5g/L氢氧化钾溶液中：

d、HPLC流动相为15mmol/L(NH₄)₂HPO₄溶液，pH用10％甲酸调节至6，使用之前需经过0.45μm滤膜过滤并超声脱气：

所有的试剂均是分析纯或是优级纯，整个实验都使用超纯水；玻璃仪器使用前需经15％硝酸浸泡24h；

2)、砷的混合标准溶液：

CH₃AsO(ONa)₂·6H₂O(MMA)和Na₂HAsO₄·7H₂OAs(v)，(CH₃)₂AsO₂H(DMA)，1000μg/mL的As(III)标准储备溶液：

a、通过溶解相应量的MMA、DMA、As(V)得到100ppb/mL的各单标溶液；将As(III)也稀释至100ppb/mL，以上四种标液可在4℃冰箱存放备用：

b、混合砷标准溶液稀释配制，临用时现配：

将以上四种标液逐级稀释至100mg/mL混合标准溶液，再根据下表1配制：

表1

   序号  浓度  mg/mL  定容体  积/mL  加入水  体积/mL  加入  10％HCl体  积/mL  加入100mg/mL四  种砷形态混合标准  溶液的体积/mL  1  5  10  7.0  2.5  0.5  2  20  10  4.5  2.5  2.0  3  50  10  2.5  2.5  5.0  4  75  10  /  2.5  7.5

(3)、进行测试步骤：

取经粉碎过40目筛的水产品干样0.300g-3.000g于50mL具塞刻度试管中，加50％盐酸的溶液20mL混匀，或取捣碎匀浆鲜样2.000g-5.000g于50mL具塞刻度试管中，并用盐酸(50％)溶液定容至25mL，混匀；至70℃水浴摇床1h，使试样充分浸提；取出冷却定容至25ml，脱脂棉过滤；取0.2mL上清液加入10ml管中；加入3.4mLH₂O；0.4mLH₂O₂混匀后在70℃度水浴放置20min，使As(III)氧化成As(V)；取出后用0.45微米的水系微孔滤膜过滤，上机测定无机砷值：

(4)、实验所用的仪器条件；

1)、HPLC液相色谱条件：流动相15mmol/L(NH₄)₂HPO₄(pH 6.0)，流速1mL/min；进样体积100μL；辅阴极46mA；蠕动泵转速65rpm；

2)、HG氢化物发生条件：还原剂成分：1.5％KBH₄+0.5％KOH，流速：6.0mL/min；载流成分：7％HCl，流速：6.0mL/min；

3)、AFS原子荧光光谱条件：灯高性能砷空心阴极灯，193.7nm；负高压285V；灯电流100mA；载气氩气，400mL/min；屏蔽气氩气，600mL/min；

(5)、结果计算：

1)、定性：开机后按上述条件进行设置，待稳定后，先做标准曲线，然后测定处理好的样品溶液；在上述液相色谱和原子荧光条件下用进样针吸取0.3-0.5mL，采用手动进样器进行测定，用峰高或峰面积外标法定量；在上述色谱条件下亚砷酸盐As(III)、二甲基砷化合物DMA、一甲基砷化合物MMA、砷酸盐As(V)依次保留时间约为2.599min、3.221min、5.075min、8.994min；

2)、定量：待测样品中亚砷酸盐As(III)、二甲基砷化合物DMA、一甲基砷化合物MMA、砷酸盐As(V)的色谱峰保留时间与标准溶液相比变化范围在±5％之内即认为该待测定物质；

结果计算与表述：

用数据处理软件中的外标法，绘制标准工作曲线，将标准工作曲线保存，然后将样品峰分析处理，用外标校正，即可得到待测溶液中的亚砷酸盐As(III)、二甲基砷化合物DMA、一甲基砷化合物MMA、砷酸盐As(V)的浓度，按下面式(1)计算，可得试样中待测物的含量：

X＝C×V×F/m×1000...............        (1)

式中：

X-样品中待测物的含量，mg/kg；

C-待测液中无机砷的浓度，ng/ml；

m-称样量，g；

V-测定液体总体积，mL；

F-稀释倍数。