[发明专利]一种向单个鸟卵注射方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种向鸟卵注射的方法，特别是涉及一种向单个鸟卵定点、定量注射的方法，尤其适合于自然孵化状态下的晚成雏小型鸟卵的胚胎各期注射。 

背景技术

鸟类为卵生动物，它的胚胎发育是离开母体的，有利于运用转基因技术、胚胎干细胞技术、人工授精技术、动物克隆技术及放射性同位素标记示踪技术等现代生物学技术对其个体发育进行研究。 

与鸡、鸭、鹅等较大型卵相比，白腰文鸟、鹦鹉、金丝雀等小型鸟卵具有卵壳薄，易开口，内容物体积小等特点。注射成功率易受温度、注射物体积、机械损伤等因素的影响，要想在保证较高出壳率和成活率的前提下有效完成定点、定量注射，一套合适的向鸟卵内定点、定量注射物质的方法尤为关键。 

传统的单卵注射方法通常使用医学注射器或微量进样器，在侧光照射下进行注射。这种方法不但注射位置不精确，注射深度不易控制，对鸟卵的损伤大，且注射后，针内存药量大，浪费注射物质。另外，注射针通常被循环使用，容易引起交叉感染，降低鸟卵的出壳率、成活率。传统方法的另一不足之处在于，未能很好地解决中小型鸟卵定点、定量注射问题，给相关研究带来极大不便。中国专利02105130.5和99815436.9的方法比较适合人工孵化的大中型早成雏鸟卵(如鸡、鸭等)的工业化批量注射，不但设备昂贵，而且无法杜绝注射过程中的交叉感染问题；同时也无法解决注射时鸟卵的朝向位置与孵化过程中的晚成雏鸟卵自然孵化朝向位置一致的问题。(因二者均须预先将鸟卵的朝向位置调整成钝端气室向上，然后利用注射针经鸟卵钝端的气室进行注射)另外，针对小型鸟卵，如白腰文鸟卵、金丝雀鸟卵、鹦鹉鸟卵等小型鸟卵，会因注射入一定体积的物质后卵中的内容物体积增大，而出现内容物(包括注射物质)从卵壳上开口处溢出的现象，不易完成定量注射，也不易封口，对于注射同位素标记的物质也容易造成环境污染。若开口处卵壳下有重要的结构，开口时易造成此重要结构的损伤。以上所述问题，其他相关专利均未解决。 

发明内容

本发明的目的在于，为解决上述问题，提供成本较低，无污染，可提高出壳率及成活率的一种向鸟卵注射的方法。 

本发明涉及一种向单个鸟卵定点、定量注射的方法，其操作步骤如下： 

1、将鸟卵在孵化温度下定位在预定的朝向位置； 

2、在卵壳上欲注射位置旁1-2mm处选择开口位置并用酒精消毒； 

3、用消毒的实心针在卵壳上的开口位置以及其下的外壳膜、内壳膜上同时制成一个同等大小的小开口，直径小于2mm。 

4、轻轻转动鸟卵使卵内欲注射位置与卵壳上的小开口对准； 

5、通过小开口伸入一个已消毒的一次性注射针； 

6、通过一次性注射针向卵中注射物质； 

7、将卵在低于孵化温度1-10℃环境下降温小于10分钟； 

8、收回一次性注射针； 

9、使鸟卵在纵切面内转动5-45°，使注射针道口偏离卵壳上的开口； 

10、用融化的石蜡封闭开口； 

11、在孵化温度下待石蜡凝固； 

12、将鸟卵放回原处孵化。 

本发明的优点在于： 

1.成本较低 

本方法以传统的生理学仪器——玻璃微电极作为注射工具，使用时将其连接在移液枪上，因此，成本低廉。 

2.操作快捷 

自然孵化状态下，鸟卵的长轴一般呈水平位置，而钝端气室位于侧方。本方法注射时不须经过气室，卵的朝向位置与自然孵化状态下的朝向位置一致，从鸟巢中取出的卵直接可按照本方法注射，不需要再另花费时间调整其钝端位置，从而从根本上节约了时间。同时，避免了长时间放置过程中环境的改变对胚胎发育以及出壳率及成活率的影响，更适合由亲鸟孵化的卵，尤其适合由亲鸟孵化的小型晚成雏鸟卵。 

3.单卵注射 

鸟卵在胚胎发育过程中胚胎逐渐由相对静止状态转变为相对运动状态。中期的胚胎通常在卵中成无规律的转动或泳动(在透射光下肉眼清晰可见)。单卵注射可以针对不同的具体情况瞬时注射，针对性更强。更适合由亲鸟孵化的卵，以及由亲鸟孵化的小型晚成雏鸟卵，尤其是珍稀鸟卵的注射。 

4.刺激小、损伤小