[发明专利]从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽及其在抗菌药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于生物医学领域，尤其涉及从东北林蛙皮肤 中分离出抗菌肽及其在抗菌药物中的应用。

背景技术：

自从抗生素发明以来，人类在控制和治疗微生物感染 疾病中取得了较大的成就，但随着药物的持续使用，目前微生物抗药 性已成为临床微生物感染疾病治疗的重大问题，以至于某些病原细菌 已没有临床治疗的一线药物。万古霉素抗性的葡萄球菌、肠球菌以及 其他革兰氏阴性感染疾病目前均是世界范围内的临床难题。三类主要 引起脑膜炎的细菌在临床上也出现了强的抗药性，抗青霉素、氯霉素 脑膜炎双球菌，肺炎球菌，对抗新头抱菌素抗生素的肺炎球菌也广泛 出现。因此新一类抗生素的研制已成为当务之急和国际上的热点。与 目前广泛使用的抗生素相比，多肽抗生素具有很多优点：如在最小作 用浓度时，快速而广谱的杀灭微生物(包括目前临床抗药菌)，对真 菌也有抑制作用，抗性菌株生成性小，对局部感染和全身感染都有效。 由此看来，在目前不少病原菌对已有抗生素逐渐产生耐药性，而新的 抗生素发现又极为困难的情况下，多肽类物质正成为新一类抗生素的 发展对象，其研制目前受到广泛重视。

两栖类动物的皮肤和内脏具有广泛的药理活性和临床疗效，很多 两栖类动物在中国属于传统中药和民族药物而广泛应用，如东北林蛙 (哈士蟆)、中华蟾蜍、大蹼铃蟾等。已报道药理活性有广谱抗微生 物作用、抗肿瘤、局部麻醉、镇痛、免疫调节、心血管系统作用等。 从这些传统药物中寻找特定药理活性的单体化合物是中药现代化的 重要内容之一。在国外，两栖类皮肤特定药理活性单体化合物的寻找 已是新药发明的热点，据文献报道从爪蟾(Xenopus iaevis)皮肤分 泌液获得的抗菌肽Magainin具广谱抗微生物作用，同时具有抗肿瘤 活性；国外学者也已报道从东方铃蟾(Bombina orientalis)和花铃 蟾(Bombina variegata)中分离出若干具广谱抗微生物活性的多肽 类物质，如Bombinin和BLP-like多肽。

由于抗菌肽作为新一代抗菌药物的诱人前景，肽类抗生素已引起 世界的广泛关注，如Magainin制药公司宣布，他们生产的爪蟾皮肤 抗菌肤Magainin类似物MSI-78用于治疗926例糖尿病患者因多 种细菌感染而引起足部溃疡的III期临床结果表明，MSI-78与 ofloxacin有同样的效果，但产生更小的副作用。Intrabiotics公 司生产的抗菌肽IB-367已获准用于治疗癌症病人因多种细菌感染 而引起的口腔溃疡一期临床试验。动物实验研究表明，天蚕抗菌肽和 蜂毒抗菌肽的部分序列杂合而成的含12-18氨基酸残基的多肤对绿 脓假单胞菌引起的兔眼感染有良好的治疗作用。

我国对两栖类药物的应用有悠久的历史，但对其活性成分和药理 性质的研究主要集中于生物碱等有机小分子，对其皮肤活性肽类物质 的研究还较少。东北林蛙主要分布于我国的东北长白山地区，是我国 的特色资源动物之一，也是特色的民族民间药物。

发明内容：

本发明的目的是基于上述现有技术基础，提供一种具 有广谱抗微生物(包括革兰氏阳性细菌，革兰氏阴性细菌、真菌)， 抗肿瘤活性的从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽。

本发明的另一目的是提供从东北林蛙皮肤中分离出的抗菌肽在 抗菌药物中的应用。

为了实现本发明的目的，本发明采用的技术方案是：从东北林 蛙皮肤中分离出的抗菌肽，其特征在于是从东北林蛙皮肤分泌物中分 离得到的两条单链多肽：分子量为1459.9、等电点为9.70的具有序 列表中SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列的单链多肽，或分子量为 2184.2，等电点为12.60的具有序列表中SEQ ID NO.2所述的氨基酸 序列的单链多肽。

从东北林蛙皮肤中分离出的两条抗菌肽，是我们首次从两栖类动 物东北林蛙皮肤分泌物中分离得到的特异性单链多肽，分子量为 1459.9，等电点为9.70，氨基酸全序列为IIPLPLGYFAKKT，我们命名 为dybowskin-1CDYa。分子量为2184.2，等电点为12.60，氨基酸全 序列为SAVGRHSRRFGLRKHRKH，我们命名为dybowskin-2CDYa。