[发明专利]人猪重配轮状病毒

说明书

技术领域

本发明涉及利用生物技术的构建、定性以及操作猪轮状病毒重组株的方法：1人体减毒猪轮状病毒株。2覆盖G1，G2，G3，G4，G5，G6，G8，G9，G10及P1A，P1B，P2A基因型。

背景技术

轮状病毒腹泻对发展中国家，甚至于发达国家都是一个巨大的健康负担。小于5岁的儿童每年约有592,000的死亡病例，在发展中国家比例最大。尽管发达国家死于轮状病毒感染的人数较少，但是从整体看，轮状病毒疾病引起的医疗负担也是巨大的。在美国每年有20例死亡，50,000例医疗救治，500,000例医生出诊，以及大于1亿美元的经济损失。因此一个有效且安全的轮状病毒疫苗，对世界公众卫生是一个重大突破。目前已经开发的轮状病毒疫苗，无论是天然的，或是人工重组获得的，大都是口服疫苗，都能有效预防系列轮状病毒疾病。这些产品包括猿猴四价疫苗，牛三价轮状病毒疫苗，单价人轮状病毒疫苗，单价羊轮状病毒疫苗，这些疫苗均在世界各地，不同人种间进行了临床实验。轮状病毒外壳蛋白中的VP7和VP4，已被验证可以独立的诱导产生中和抗体，进行免疫保护及预防疾病。

200多年前，Jenner率先利用病毒在人体内被限制性复制的特性，采用来源动物基因的减毒疫苗做预防人类相关的疾病，开创动物疫苗免疫。这类疫苗在人体是减毒的，在预防人类疾病方面显示具有较高的活性。猪轮状病毒在哺乳动物和禽类轮状病毒中是独特的，它与人类轮状病毒具有特殊的关系。例如：1、利用RNA-DNA杂交技术可以判定猪轮状病毒与人轮状病毒在基因型上具有紧密联系。2、人轮状病毒10个糖蛋白中有8个在猪中检测到，而在牛和猿猴中只检测到四个。3、10个蛋白激酶中有四个在猪中检测到，而在牛和猿猴中分别只有两个和零个被检测到。

有趣的是，猪轮状病毒在Jennerian的方法中还没被应用。轮状病毒株VP4基因P(6)与各种G型结合，开始时被鉴定在新生婴儿中有极少的症状，现在被鉴定在新增婴儿及儿童中显著增加。

发明内容

本发明提供了轮状病毒重配株的免疫机制和在人体应用的方法。描述的重配是将单价重配猪轮状病毒和人轮状病毒结合，以提供与临床中A组人轮状病毒血清型最密切的，至少能诱导人体轮状病毒抗体产生的基因配方。

本发明采用具有独特性质的猪轮状病毒gottfried株，特别是血清型为P[6]，G4的gottfried株。VP7G4G4血清型与牛轮状病毒UKVP7血清型P[5]G6同样代表了，在全球传染中占重要比例的人类轮状病毒的一种G血清型。同时，猪轮状病毒VP4的中和性质与人轮状病毒VP4的中和性质接近，并具有重要的临床作用。通过RNA-RNA杂交，表明猪轮状病毒gottfried株和人轮状病毒基因型接近。特性证明含有可与人轮状病毒编码抗原产生免疫交叉反应的猪轮状病毒gottfried株，其临床表现为P7血清型1，2，3，4，5，6，8，9，10和/或VP4血清型1A和1B的免疫组分，很有效用。

图1显示了人轮状病毒RNA通过10％聚丙烯酰氨电泳的结果。第一道D株。第二道重组株Gottx D，第三道猪轮状病毒gottfried株，第四道重组株Gottx DS-1，第五道重组人轮状病毒DS-1，第六道人轮状病毒M株，第七道重组GottxM，第八道猪轮状病毒gottfried株，第九道重组株Gottx，第十道人轮状病毒ST3，第十一道轮状病毒IAL28，第十二道重组Gottx IAL28，第十三道猪轮状病毒gottfried株。电流为13mA，电泳15h后通过银染直观比较。

图2显示了牛轮状病毒RNA电泳图谱。第一道牛轮状病毒UK株。第二道重组株GottxUK，第三道猪轮状病毒gottfried株，第四道重组株Gottx 1290-1，第五道人轮状病毒1290，第六道人轮状病毒AU32株，第七道重组GottxAU32，第八道猪轮状病毒gottfried株，第九道重组株GottxKC-1，第十道牛轮状病毒KC-1，第十一道人轮状病毒Mo，第十二道重组Mo x gott，第十三道猪轮状病毒gottfried株。第十四道重组DS-1x Gott，，第十五道人轮状病毒DS-1，电流为13mA，电泳15h后通过银染直观比较。

本发明提供供人体使用的重配轮状病毒疫苗。组分是通过结合单价的重配动物轮状病毒和一个人轮状病毒或者是别的能与人抗原发生交叉反应的抗原的动物病毒，来提供与人轮状病毒A组临床研究关系最密切的血清型之一，从而诱导产生人轮状病毒特异性抗体反应。