[发明专利]一种抗肿瘤类抗生素及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种抗肿瘤类抗生素及其制备方法， 具体涉及一种具有抗肿瘤活性的抗生素和其药学上可接受的盐；本发明也 涉及这一化合物的微生物发酵方法和其在制造抗肿瘤药物上的用途。

背景技术

肿瘤严重威胁着人类的生命健康，世界各国都投入大量人力物力开发 新的高效抗肿瘤药。化学治疗在肿瘤治疗中起着不可替代的作用。现已经 知道有许多经培养不同种微生物所产生的抗生素类物质可表现有抗肿瘤活 性。迄今为止，已广泛使用了某些已知的抗肿瘤在临床实践中为治疗肿瘤 提供了一种重要的治疗手段。然而，临床上使用的许多已知的抗肿瘤抗生 素物质都对人体有明显的毒性，从而在应用上受到很大限制。在这个意义 上说，临床上所使用的所有已知抗肿瘤抗生素均不一定是令人完全满意的 抗肿瘤药物。因此，目前仍急需找到并提供既对人体毒性低，又有高抗肿 瘤活性，而且可有效而安全地用于治疗人体肿瘤或癌症的新的物质。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于治疗肿瘤疾病的新的抗肿瘤类抗 生素3-取代-2-吲哚酮类化合物，其分子结构式为C₁₅H₁₂NO₂，分子量238， 化学结构式如式(I)所示。熔点185.0-186.9℃，外观呈橙黄色粉末，它 在药学上可接受的盐是盐酸盐、硫酸盐或者有机盐。

本发明抗生素的结构采用核磁共振、红外、紫外等光谱学的方法确定。

本发明的另一个目的是提供这种抗肿瘤抗生素的发酵用菌种和制备方 法。

经初步测试，该化合物体外能有效抑制多种肿瘤细胞的生长，其IC₅₀在3-27μg/mL范围内，具有显著的抗肿瘤活性。

式1

本发明的吲哚酮类化合物是从山西省芮城县古魏乡土壤中分离得到链 霉菌Y05A-1065(CGMCC No.：2363)的发酵培养物中提取得到，所用的链 霉菌Y05A-1065已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，保藏号为CGMCC No.：2363，保藏日为2008年2月19日。

制备方法的具体步骤如下：

(1)链霉菌Y05A-1065(CGMCC No.：2363)的斜面菌株培养：斜面培养 基按重量比为：葡萄糖0.5-1.5，酵母粉0.05-0.5，蛋白胨0.05-0.2， K₂HPO₄·3H₂O 0.01-0.3，MgSO₄·7H₂O 0.01-0.1，蒸馏水100，制成 斜面培养基，挑取菌种接入斜面培养基，28-30℃恒温静止培养7-9 天；

(2)链霉菌Y05A-1065(CGMCC No.：2363)种子液的制备：种子培养基 按重量比为：葡萄糖0.5-1.5，酵母粉0.05-0.5，蛋白胨0.05-0.2， NaCl 0.01-0.05，5K₂HPO₄·3H₂O 0.01-0.3，MgSO₄·7H₂O 0.01-0.1， 水100，制成种子培养液，挑取斜面菌种接入，28-30℃恒温，220r/min 震荡培养24-36小时；

(3)链霉菌Y05A-1065(CGMCC No.：2363)的发酵液的制备：发酵培养 基按重量比为：玉米淀粉2.0-10.0，黄豆饼粉0.5-3.5，花生饼粉 0.05-1.0，酵母粉0.01-0.5，玉米浆0.01-0.2，CoCl₂·H₂O 0.01-0.03，pH6.8，水100，28℃2 20r/min摇床振摇培养120-168 小时；

(4)将上述培养好的发酵液过滤，收集菌体，晾干；菌体在室温下用甲 醇浸泡，合并提取液，浓缩得到总提取物；用水重新溶解；

(5)将上述去除菌体的培养液过分子量为10000的超滤膜，以进一步去 除可溶性大分子物质；

(6)收集超滤膜过滤后的滤液，加热浓缩(温度不超过50℃)至原体积 的1/20-1/5，用乙酸乙酯以等体积比加入到浓缩液中，萃取三次， 合并萃取相，浓缩乙酸乙酯萃取液，在硅胶柱中进行色谱分离，以 CHCl₃-MeOH为洗脱剂进行梯度洗脱；