[发明专利]食品中鱼类过敏原快速检测试剂盒的制备和检测方法

权利要求书

1.一种鱼类过敏原快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)-(2)：

(1)PCR扩增反应液A

包括10×PCR反应缓冲液、0.1-0.4mmol/L dNTP(含dUTP)、2-4mmol/L硫酸镁、1-2U Taq酶、0.2-0.5U UNG酶、0.2-0.6μmol/L上游引物、0.2-0.6μmol/L下游引物′、0.2-0.6μmol/L TaqMan-MGB探针；

其中10×PCR反应缓冲液含有100mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、500mmol/L氯化钾和1％曲拉通X-100；

其中上游引物序列为：5′-CAGGACAAGAGTGGCTTCAT-3′、下游引物序列为：5′-GAAGTTCTGCAGGAACAGCTT-3′；

其中TaqMan-MGB探针中间部位有一个兼并碱基，序列为：5′-AGGAGGA(T/G)GAGCT-3′；

(2)UNG酶：1U/μL。

2.根据权利要求1中所述的鱼类过敏原快速检测试剂盒，其特征是上述的上游引物、下游引物、TaqMan-MGB探针的体积比为：1∶1∶1。

3.根据权利要求1中所述的鱼类过敏原快速检测试剂盒，其特征是上述的dNTP内的四种脱氧核糖核酸的质量比为dUTP∶dATP∶dGTP∶dCTP＝2∶1∶1∶1。

4.一种使用如权利要求1所述的试剂盒快速检测鱼类过敏原的方法，其特征是依次包括下列步骤：

(1)待检样品DNA的提取；

(2)鱼类过敏原的实时荧光PCR扩增：

A.在装有如权利要求1所述的PCR扩增反应液A的反应管中加入1μL待检样品DNA，混匀；

B.将PCR反应管放入荧光PCR仪，按下述反应条件完成PCR扩增：

50℃ 2min，1个循环，激活UNG酶；

94-95℃ 4min，1个循环，灭活UNG酶，预变性；

94-95℃ 10-20sec；60℃ 20-40sec，45个循环，PCR扩增；

(3)应用荧光定量PCR仪随机软件，分析扩增结果。